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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

[求助] 急! 考马斯亮蓝法标准曲线建立求助!

小弟这两天想用考马斯亮蓝法G250测定材料与某种蛋白的结合量,先做标曲,照网上的方法取 10 mg考马斯亮蓝用5 ml 95%乙醇超声溶解,加10 ml 85% 磷酸,再用水定容到 100 ml。

接着取1mg/ml的BSA用不同量用PB缓冲液稀释到1 ml。从第一个开始加入 5 ml考马斯亮蓝溶液。混匀,等待3 min后测定 。接着类似方法测定第二个等。结果很崩溃,标准曲线线性很差,从BSA 60ug起后面的数据几乎停留不动,而且后来重新测定BSA 20ug的数据又比第一次测定的小,这是什么原因呢?

可见波长 595 nm,所有的玻璃仪器都洗涤干净并用乙醇冲洗烘干,蛋白用的是PB溶液溶解稀释。考马斯亮蓝现配现用,里面无可见不溶物。

测了四次了 都是这样的数据
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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

有人回复吗
2楼2013-06-25 18:00:46
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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

有人回复吗
3楼2013-06-26 08:32:19
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liou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
定量测定蛋白浓度,为什么不直接用考马斯亮蓝试剂盒呢,南京建成的。方便又快捷!
4楼2013-06-26 09:05:57
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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liou at 2013-06-26 09:05:57
定量测定蛋白浓度,为什么不直接用考马斯亮蓝试剂盒呢,南京建成的。方便又快捷!

老板没钱 只让用这样的方法
5楼2013-06-26 09:33:51
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liou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

才几十块钱,这么抠,还做什么实验啊?
6楼2013-06-26 17:33:00
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阳光西骑士

木虫 (正式写手)

问题已解决,是考马斯亮蓝出问题了,换了就可以了
7楼2013-06-27 09:45:36
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