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阳光西骑士木虫 (正式写手)
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急！ 考马斯亮蓝法标准曲线建立求助！
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小弟这两天想用考马斯亮蓝法G250测定材料与某种蛋白的结合量，先做标曲，照网上的方法取 10 mg考马斯亮蓝用5 ml 95%乙醇超声溶解，加10 ml 85% 磷酸，再用水定容到 100 ml。 接着取1mg/ml的BSA用不同量用PB缓冲液稀释到1 ml。从第一个开始加入 5 ml考马斯亮蓝溶液。混匀，等待3 min后测定 。接着类似方法测定第二个等。结果很崩溃，标准曲线线性很差，从BSA 60ug起后面的数据几乎停留不动，而且后来重新测定BSA 20ug的数据又比第一次测定的小，这是什么原因呢？ 可见波长 595 nm，所有的玻璃仪器都洗涤干净并用乙醇冲洗烘干，蛋白用的是PB溶液溶解稀释。考马斯亮蓝现配现用，里面无可见不溶物。 测了四次了 都是这样的数据 |
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