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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建问题
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mmzhang

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建问题

目前在构建基因表达载体，遇到如下问题，希望大虾们能够帮帮忙。
构建了某基因的超表达载体（用的是pCAMBIA1300改造后的载体），经测序后序列没有问题，但是转化农杆菌后却没有克隆，已经重复做了几次，都是同样的结果。以我目前的经验，实在是不知道什么原因了。
PS: 1、该基因在酵母表达载体中正常表达；2、其它基因用的也是pCAMBIA1300改造后的载体，转化后能够正常生长。
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1楼 2013-06-14 11:05:42
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mmzhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 玲珑琉璃 at 2013-06-14 19:01:48
那是你基因的问题？

不晓得呢，从来没遇到过这样的情况。
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6楼2013-06-16 18:33:29
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玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-14 14:04:27
mmzhang: 金币+2 2013-06-16 18:32:50
你再借个质粒做阳性对照，一起转化农杆菌吧，看是不是农杆菌感受态的问题。
或者你从别的实验室借个农杆菌感受态，一起转了，如果有，给你省点时间。
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一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去，一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格
2楼2013-06-14 11:48:57
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nobodykqq

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mmzhang(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-14 14:04:38
mmzhang: 金币+2 2013-06-16 18:32:54
把空载和重组质粒同时转化农杆菌后看结果。
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拒绝平庸，追求卓越！
3楼2013-06-14 12:01:54
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mmzhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 玲珑琉璃 at 2013-06-14 11:48:57
你再借个质粒做阳性对照，一起转化农杆菌吧，看是不是农杆菌感受态的问题。
或者你从别的实验室借个农杆菌感受态，一起转了，如果有，给你省点时间。

农杆菌感受态没问题的，因为转了其他基因的载体都能长。
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4楼2013-06-14 12:03:50
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