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yangjingjing

木虫 (正式写手)

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[求助] 原核表达分子量问题

好容易构建了质粒（组氨酸标签），测序正确，而且分析表达蛋白分子量应该在27KD，可是跑SDS时在25KD，35KD都有表达，纯化完后在35KD处有明显的单条带，为什么呢？测序结果如下，求各位大神帮忙分析下~~跪谢

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2013-06-08 17:17:43, 103.85 K

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努力打败一切

1楼 2013-06-08 17:18:49

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yangjingjing

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引用回帖:

4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-06-09 16:54:20
大一点是有可能的，我曾经做过一个蛋白，计算分子量28KD，PAGE胶分子量35KD。质谱显示是正确的。不过你还是确认一下你的终止密码子是在哪儿终止的，没问题的话这样也是有可能的。

恩，就是软件分析的，是在组氨酸之后就终止了。可是为什么IPTG诱导完25,35位置有增加，纯化完SDS 只有35位置，转膜却不和目的抗体结合呢？是说明没有表达吗？