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夏沐浅

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE结果求分析原因

跑的是marker蛋白，12%的分离胶，没有浓缩胶，跑着呈倒梯形，而且一共有十种蛋白的，我的出来了8条，15mA的电流，电压开始只有60V，而且83*73*1的胶跑了1：40，时间也这么长，这个是怎么回事啊？
上面的图是考染之后的，下面的是跑完之后拍的，
SDS-PAGE结果求分析原因
SDS-PAGE自制胶 zlp 2013-06-06.jpg


SDS-PAGE结果求分析原因-1
P6069319.JPG
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清浅
1楼 2013-06-07 15:52:24
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-09 11:08:00
普通SDS-PAGE在小分子量区域的分辨率变差属于正常现象。而且你做的至是12%的胶，10kD以下的蛋白不太可能分开的。如果做浓度大一些的胶或者梯度胶会有所改善。如果你要分小分子量的蛋白，最好跑tricine胶。
条带从 ...

做得好些的条带应该是这样的，就不知道我做的哪儿出问题了。
SDS-PAGE结果求分析原因-2
图.jpg
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清浅
9楼2013-06-17 09:41:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-08 08:58:42
夏沐浅: 金币+5, ★有帮助 2013-06-08 13:56:42
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力，应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题，问一下缺的什么分子量的带？12%的胶上对有些分子量的蛋白可能分离效果差，跑不出来的。关于电压电流的问题，你设置的是稳压还是稳流跑？如果是稳流，需要把电压调高到200V以上，刚开始的时候电压比较低，60V也算是正常的，随着电泳过程电压会逐渐升高的。跑1小时40分不是很久，根据你设置的电流，一般小胶差不多是这个时间。
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2楼2013-06-08 00:27:33
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-08 00:27:33
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力，应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题，问一下缺的什么 ...

缺的那两个分子量是10kd和15kd的，虽然比较小，但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的，不是正常都在200V左右，所以电压设置的是300V，开始是60V，跑完了也才100V，而且做得好的胶跑完的话大概一个小时。
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清浅
3楼2013-06-08 14:00:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢进一步的帮助 2013-06-09 08:25:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-08 14:00:48
缺的那两个分子量是10kd和15kd的，虽然比较小，但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的，不是正常都在200V左右，所以电压设置的是300V，开始是60V，跑完了也才100V，而且做得好的胶跑完的话大概一个 ...

10kd的带有可能接近溴酚蓝，所以看不太到也有可能。如果不是marker的质量问题的话，应该可以看到15kda的带。总体来说你的marker其它带不错。至于电压问题，看你设的电流是多少了，如果是小胶10-15mA/gel电压应该是你说的那个范围，时间也差不多。如果想跑快一些也是可以的，有人用20-25mA跑，不过可能会产生较多热。
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4楼2013-06-08 23:51:17
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