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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE结果求分析原因

跑的是marker蛋白,12%的分离胶,没有浓缩胶,跑着呈倒梯形,而且一共有十种蛋白的,我的出来了8条,15mA的电流,电压开始只有60V,而且83*73*1的胶跑了1:40,时间也这么长,这个是怎么回事啊?
上面的图是考染之后的,下面的是跑完之后拍的,
SDS-PAGE结果求分析原因
SDS-PAGE自制胶 zlp 2013-06-06.jpg


SDS-PAGE结果求分析原因-1
P6069319.JPG
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清浅
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-09 11:08:00
普通SDS-PAGE在小分子量区域的分辨率变差属于正常现象。而且你做的至是12%的胶,10kD以下的蛋白不太可能分开的。如果做浓度大一些的胶或者梯度胶会有所改善。如果你要分小分子量的蛋白,最好跑tricine胶。
条带从 ...

做得好些的条带应该是这样的,就不知道我做的哪儿出问题了。
SDS-PAGE结果求分析原因-2
图.jpg

清浅
9楼2013-06-17 09:41:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-08 08:58:42
夏沐浅: 金币+5, 有帮助 2013-06-08 13:56:42
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力,应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题,问一下缺的什么分子量的带?12%的胶上对有些分子量的蛋白可能分离效果差,跑不出来的。关于电压电流的问题,你设置的是稳压还是稳流跑?如果是稳流,需要把电压调高到200V以上,刚开始的时候电压比较低,60V也算是正常的,随着电泳过程电压会逐渐升高的。跑1小时40分不是很久,根据你设置的电流,一般小胶差不多是这个时间。
2楼2013-06-08 00:27:33
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-08 00:27:33
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力,应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题,问一下缺的什么 ...

缺的那两个分子量是10kd和15kd的,虽然比较小,但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的,不是正常都在200V左右,所以电压设置的是300V,开始是60V,跑完了也才100V,而且做得好的胶跑完的话大概一个小时。
清浅
3楼2013-06-08 14:00:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢进一步的帮助 2013-06-09 08:25:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-08 14:00:48
缺的那两个分子量是10kd和15kd的,虽然比较小,但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的,不是正常都在200V左右,所以电压设置的是300V,开始是60V,跑完了也才100V,而且做得好的胶跑完的话大概一个 ...

10kd的带有可能接近溴酚蓝,所以看不太到也有可能。如果不是marker的质量问题的话,应该可以看到15kda的带。总体来说你的marker其它带不错。至于电压问题,看你设的电流是多少了,如果是小胶10-15mA/gel电压应该是你说的那个范围,时间也差不多。如果想跑快一些也是可以的,有人用20-25mA跑,不过可能会产生较多热。
4楼2013-06-08 23:51:17
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