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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 『求助』酶活测定遇到困难
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yangxijia

新虫 (初入文坛)

[求助] 『求助』酶活测定遇到困难

在次向各位牛人求助：
最近在做一个脂酰CoA合成酶的酶活分析，体系是60 mM PBS containing 10 mM MgCl2, 5 mM ATP, 2.5 mM DTT, 1 mM CoASH, 0.1 mM fatty acid和2ug的重组蛋白，30度反应1h；蛋白只有一个his tag，理论上不会对活性有太大影响，但用LC—MS根本测不到一点产物，分析了好久也找不到原因，真的是走投无路啊。由于CoA是水溶的，所以不知道里面的盐离子会不会产生影响，不知道有什么好的抽提萃取方式。
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1楼 2013-05-22 22:15:56
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

没产物，楼主的反应没成功啊。分析原因可能有这几个：
1.酶本身的问题，是不是你酶的量或者活力太差
2.配置的buffer里面是否有其他阳离子干扰，和Mg离子产生竞争性抑制
3.建议缓冲液由PBS换成Tris-Hcl 试试
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2楼2013-05-31 00:07:27
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