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yuhai4444

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】固氮菌的固氮能力测定一般是用什么方法啊? 已有14人参与

最近试验遇到困难了,筛选出来的固氮菌,消煮后用凯式定氮仪测,却没有固氮力,不知道怎么办,我看文献上很多用的是乙炔还原法,很少用凯式定氮仪来侧固氮菌的固氮能力,不知是方法不太好,还是本来筛出来的,就没有固氮力,这一步没有做好,接下来的工作都没有办法做了,郁闷中啊,请大家帮忙分析分析。
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yuhai4444

木虫 (正式写手)

引用回帖:
1965521楼: Originally posted by nongkeyuan99 at 2012-05-16 21:21:44:
气象色谱仪好搞,关键是前期处理,怎么搞定

将菌先培养在血清小瓶中,在28~30℃下培养24h~48 h后,将血清小瓶盖在无菌条件下换成橡胶塞,用无菌注射器抽出10%的气体,然后给每瓶注入2mLC2H2,再置培养箱中培养24h~48 h。从各培养瓶中取气样10μL,注入气相色谱仪(GC)中,测C2H2,C2H4的生成情况。从气相色谱仪显示屏的C2H4 峰值判断有无C2H4的产生, 以接种但未注入C2H2的试管作为对照。按下列公式计算固氮酶活性:
N=(hx×C×V)/(hs×常数×t)
式中,hx 为样品峰值,hs 为标准C2H4 峰值,C 为标准C2H4 浓度(nmol•mlL−1), V 为试管体积(mL), 常数为标准C2H4 在测试时的体积(mL),t 为样品培养时间(h), N 为产生的C2H4 浓度[即固氮酶活性, nmol(C2H4)•h−1•mL−1]。
9楼2012-05-21 10:31:50
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yunhua9681

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-13 00:25:40
请使用乙炔还原法进行测定。如果没有固氮酶活的话,可能是培养条件有问题,测定酶活的培养基应该是无氮培养基。
2楼2010-12-12 19:08:36
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yangjun130

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也许是固氮能力弱,你多准备些样品,提高样品中总氮含量才是,也许是检测限和精度不够准确之类的
3楼2010-12-12 20:14:02
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yuhai4444

木虫 (正式写手)

谢谢你给的建议,非常感谢,你是做这方面的吗?
4楼2010-12-15 15:13:48
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zhaoyu2881

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我查到的文献一般几乎都是乙炔还原测定的,我也打算准备测固氮酶活性,不知道楼主现在实验进行的怎么样了啊?还想问一下,那乙炔气体是怎么买的到啊~~
Thatislife,onlylifehurts.
5楼2012-05-15 21:56:08
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nongkeyuan99

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
好兄弟,我最近也在愁这个事情,准备用乙炔还原法测,我是中国农科院的,你是哪的,一起交流下呗
加油
6楼2012-05-16 15:58:56
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yuhai4444

木虫 (正式写手)

我是用气相色谱仪,在别人那借用的,
7楼2012-05-16 20:59:06
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nongkeyuan99

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
气象色谱仪好搞,关键是前期处理,怎么搞定
加油
8楼2012-05-16 21:21:44
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兔小白

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可是原理是什么啊 能给解释一下吗?
10楼2012-11-21 08:44:01
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