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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】固氮菌的固氮能力测定一般是用什么方法啊？
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yuhai4444

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】固氮菌的固氮能力测定一般是用什么方法啊？已有14人参与

最近试验遇到困难了，筛选出来的固氮菌，消煮后用凯式定氮仪测，却没有固氮力，不知道怎么办，我看文献上很多用的是乙炔还原法，很少用凯式定氮仪来侧固氮菌的固氮能力，不知是方法不太好，还是本来筛出来的，就没有固氮力，这一步没有做好，接下来的工作都没有办法做了，郁闷中啊，请大家帮忙分析分析。
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1楼2010-12-12 10:12:32
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yuhai4444

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1965521楼: Originally posted by nongkeyuan99 at 2012-05-16 21:21:44:
气象色谱仪好搞，关键是前期处理，怎么搞定

将菌先培养在血清小瓶中，在28～30℃下培养24h～48 h后，将血清小瓶盖在无菌条件下换成橡胶塞，用无菌注射器抽出10%的气体，然后给每瓶注入2mLC2H2，再置培养箱中培养24h～48 h。从各培养瓶中取气样10μL，注入气相色谱仪(GC)中，测C2H2，C2H4的生成情况。从气相色谱仪显示屏的C2H4 峰值判断有无C2H4的产生， 以接种但未注入C2H2的试管作为对照。按下列公式计算固氮酶活性：
N=(hx×C×V)/(hs×常数×t)
式中，hx 为样品峰值，hs 为标准C2H4 峰值，C 为标准C2H4 浓度(nmol•mlL−1)， V 为试管体积(mL)， 常数为标准C2H4 在测试时的体积(mL)，t 为样品培养时间(h)， N 为产生的C2H4 浓度[即固氮酶活性， nmol(C2H4)•h−1•mL−1]。
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9楼2012-05-21 10:31:50
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yunhua9681

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-13 00:25:40
请使用乙炔还原法进行测定。如果没有固氮酶活的话，可能是培养条件有问题，测定酶活的培养基应该是无氮培养基。
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2楼2010-12-12 19:08:36
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yangjun130

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也许是固氮能力弱，你多准备些样品，提高样品中总氮含量才是，也许是检测限和精度不够准确之类的
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3楼2010-12-12 20:14:02
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yuhai4444

木虫 (正式写手)
谢谢你给的建议，非常感谢，你是做这方面的吗？
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4楼2010-12-15 15:13:48
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zhaoyu2881

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我查到的文献一般几乎都是乙炔还原测定的，我也打算准备测固氮酶活性，不知道楼主现在实验进行的怎么样了啊？还想问一下，那乙炔气体是怎么买的到啊~~
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Thatislife,onlylifehurts.
5楼2012-05-15 21:56:08
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nongkeyuan99

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
好兄弟，我最近也在愁这个事情，准备用乙炔还原法测，我是中国农科院的，你是哪的，一起交流下呗
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加油
6楼2012-05-16 15:58:56
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yuhai4444

木虫 (正式写手)
我是用气相色谱仪，在别人那借用的，
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7楼2012-05-16 20:59:06
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nongkeyuan99

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
气象色谱仪好搞，关键是前期处理，怎么搞定
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加油
8楼2012-05-16 21:21:44
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兔小白

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可是原理是什么啊 能给解释一下吗？
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10楼2012-11-21 08:44:01
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