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zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！

最近从载体pEGFP-C3上扩neo基因，再连到pMD18-T载体上，但没有neo抗性，请大牛指导下哪里出了问题，经测序，没有突变！！！小菜一枚在这里先谢谢各位牛人啦！！！
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1楼 2013-05-22 20:19:06
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:09:28
看了载体图谱,有两个启动子控制卡那抗性基因的,所以整个质粒在大肠杆菌和真核细胞都有抗性,至于你克隆的,不知道包括到哪些启动子序列,如果没有原核生物中起作用的启动子,估计就没有表达抗性基因了,或者你降低抗生素浓度试试,说不定有底水平的表达.
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为什么
9楼2013-05-23 23:04:29
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zd0017 at 2013-05-24 10:12:30
谢谢指教，看了下我克隆的序列，的确没有吧原核生物起作用的启动子ampR promoter 给克隆下来，之前完全没有看到想到这一层，学习啦
还想问一下，载体pMD18-t中也有ampR promoter 这个启动子，如果我是正向插入的话 ...

在终止子前能找到合适的插入位点，可以考虑共用。
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为什么
15楼2013-05-24 11:38:52
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