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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！
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zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！

最近从载体pEGFP-C3上扩neo基因，再连到pMD18-T载体上，但没有neo抗性，请大牛指导下哪里出了问题，经测序，没有突变！！！小菜一枚在这里先谢谢各位牛人啦！！！
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1楼2013-05-22 20:19:06
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:09:28
看了载体图谱,有两个启动子控制卡那抗性基因的,所以整个质粒在大肠杆菌和真核细胞都有抗性,至于你克隆的,不知道包括到哪些启动子序列,如果没有原核生物中起作用的启动子,估计就没有表达抗性基因了,或者你降低抗生素浓度试试,说不定有底水平的表达.
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为什么
9楼2013-05-23 23:04:29
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 21:58:12
pEGFP-C3是个真核表达载体，pMD18-T是个原核载体吧？真核和原核的表达调控元件是完全不同的。
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2楼2013-05-22 21:16:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:08:50
gyesang: 回帖置顶 2013-05-24 03:08:58
新霉素抗性基因是真核表达载体的一种筛选marker，neo基因编码新霉素磷酸转移酶，通过对G418、新霉素和卡那霉素磷酸化来降解抗生素儿实验抗性的。在原核生物宿主里应该用卡那霉素筛选。
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3楼2013-05-23 02:45:49
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zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-23 02:45:49
新霉素抗性基因是真核表达载体的一种筛选marker，neo基因编码新霉素磷酸转移酶，通过对G418、新霉素和卡那霉素磷酸化来降解抗生素儿实验抗性的。在原核生物宿主里应该用卡那霉素筛选。

谢谢你的回复，也用了kana抗性的筛了，也没克隆长出啊，不知道什么原因啊
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4楼2013-05-23 11:22:41
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