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虫儿飞不飞

木虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增引物出现问题

我的PCR扩增,条件什么的都摸索好了。反应体系也很成熟,但是第一回合成的引物使用完后,就又重新合成了引物,然后就扩增不出来了;我做了正负对照,还是没有目的条带出现。最后我觉的是引物出现问题,华大给重新合成了;可是重新合成了的引物进行扩增,依然没有目的条带,而且合成的引物管底部有一个小白或者黄点我就觉的还是它的引物有问题。请教一下大家,有没有遇到这种情况?我以前的条带很亮的。
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  • 2013-05-21 10:38:08, 295.54 K

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朝闻道,吃酸粥
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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虫儿飞不飞(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-21 13:22:14
再把模板量调整下,另外把PCR体系全部换新的
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
2楼2013-05-21 10:50:58
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虫儿飞不飞

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youngker918 at 2013-05-21 10:50:58
再把模板量调整下,另外把PCR体系全部换新的

模版我检验了 亮度挺好的。而且我也做了模版的对照
朝闻道,吃酸粥
3楼2013-05-21 11:55:59
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yinhufeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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虫儿飞不飞(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-21 13:22:28
那应该就是引物的问题了,换一家吧,建议楼主用生工的试试,生工的引物设计还是比较牛的
4楼2013-05-21 12:36:45
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j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
虫儿飞不飞(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-21 13:22:42
换生工的引物试试。华大有时候不行

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-05-21 12:46:01
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jinluzhang

新虫 (初入文坛)

引物在管底有白点就对了,那是引物粉末。还有可能是你反应体系中的某一样有问题,我们那时候dNTP出过问题,buffer出过问题
6楼2013-05-21 15:40:34
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