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蛋白之家

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于原核表达结果的分析及原因

做了4个基因的原核表达  蛋白表达图
图中1,2 为空载体pET28a(+)，3,4 为一个基因，5,6为第二个基因，7,8为第三个基因，9,10为第四个基因
   1,3,5,7,9为未诱导的蛋白表达情况条带，2,4,6,8,10为用IPTG诱导5h后的蛋白表达情况条带
   1,2诱导前后没有变化；泳道4为诱导后的第一个基因，较泳道3有明显变化，且大小与预测的蛋白大小一致；泳道6为诱导后的第二个基因，较泳道5也有差异，且大小与预测的蛋白大小一致；
   但泳道8为诱导后的第三个基因，较泳道7有两处明显差异，其中一个为与预测大小一致的，但另外一个不知道是什么原因造成的。泳道10为诱导后的第四个基因，较泳道9有三处明显差异，其中一个为与预测大小一致的，另外两个不知道是什么，请大家帮忙分析一下。
麻烦大家帮忙分析一下原因，谢谢！

FVO@@SHH4_87IPYW0KL{IM9.jpg

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1楼2013-05-15 20:01:48

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金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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你做一个WESTERN Blotting,就可以说明结果了！
用可以显色6个His标签的抗体，如果western blotting的结果显示8泳道和10泳道的蛋白条带>=2条，说明你的蛋白降解了！这只能说明你的蛋白稳定性较差！

如果western结果显示只有一条带！！！那你管他几条带，方正我还要过NI柱纯化，只有我的目的蛋白能挂上，其他的又挂不上！他可能是宿主菌的非特异性条带！第10泳道最上面最粗的那条带可能就是非特异性条带，你的诱导条件可能满足了他的表达，所以表达量就大了！！你可以参照前面泳道，都有这条带的！！

希望能给你点帮助！！