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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » TAIL-PCR克隆基因的启动子
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

[交流] TAIL-PCR克隆基因的启动子 已有7人参与

打算用TAIL-PCR克隆基因的启动子，但不知随机兼并引物（AD PRIMER）如何设计，请高手赐教
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1楼 2013-05-08 17:38:33
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十比

木虫 (著名写手)
★
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看一下华南农刘耀光的文章。
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2楼2013-05-09 07:48:38
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-09 07:48:38
看一下华南农刘耀光的文章。

请问您知不知道刘耀光具体的哪篇介绍方法或原理的文章？
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3楼2013-05-10 10:42:38
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十比

木虫 (著名写手)
★
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Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

云卷云舒啊
4楼2013-05-10 17:28:20
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-10 17:28:20
Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。

好的，谢谢啦
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5楼2013-05-11 11:06:12
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GMDGMD

捐助贵宾 (正式写手)
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估计你做的是多倍体或不重要的物种，所以没有基因组序列，对于基因组大的物种（大于水稻），tailPCR很难。建议用反向PCR。合成引物要到信誉好的公司，拿到引物后要自己检测一下引物质量。

一师兄国内做TAIL-PCR总是很不稳定，但到了米帝，从来没有fail过！

祝好！
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6楼2013-05-19 11:49:51
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by GMDGMD at 2013-05-19 11:49:51
估计你做的是多倍体或不重要的物种，所以没有基因组序列，对于基因组大的物种（大于水稻），tailPCR很难。建议用反向PCR。合成引物要到信誉好的公司，拿到引物后要自己检测一下引物质量。

一师兄国内做TAIL-PCR总 ...

谢谢！
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7楼2013-05-19 13:38:02
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-10 17:28:20
Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。

这个是所有启动子都能克隆吗？这个引物怎么设计？我看着好像是做突变体插入序列的
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8楼2014-04-07 19:04:56
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)
请问楼主P出来没，用的什么方法啊，求指教
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9楼2014-04-07 19:05:49
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十比

木虫 (著名写手)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-07 19:04:56
这个是所有启动子都能克隆吗？这个引物怎么设计？我看着好像是做突变体插入序列的...

你已知的序列相当于T-DNA序列，同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。
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10楼2014-04-09 19:44:39
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