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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

[交流] TAIL-PCR克隆基因的启动子 已有7人参与

打算用TAIL-PCR克隆基因的启动子,但不知随机兼并引物(AD PRIMER)如何设计,请高手赐教
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十比

木虫 (著名写手)


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看一下华南农刘耀光的文章。
2楼2013-05-09 07:48:38
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普通回帖

云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-09 07:48:38
看一下华南农刘耀光的文章。

请问您知不知道刘耀光具体的哪篇介绍方法或原理的文章?
3楼2013-05-10 10:42:38
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十比

木虫 (著名写手)


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Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-05-10 17:28:20
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-10 17:28:20
Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。

好的,谢谢啦
5楼2013-05-11 11:06:12
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GMDGMD

捐助贵宾 (正式写手)


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估计你做的是多倍体或不重要的物种,所以没有基因组序列,对于基因组大的物种(大于水稻),tailPCR很难。建议用反向PCR。合成引物要到信誉好的公司,拿到引物后要自己检测一下引物质量。

一师兄国内做TAIL-PCR总是很不稳定,但到了米帝,从来没有fail过!

祝好!
6楼2013-05-19 11:49:51
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by GMDGMD at 2013-05-19 11:49:51
估计你做的是多倍体或不重要的物种,所以没有基因组序列,对于基因组大的物种(大于水稻),tailPCR很难。建议用反向PCR。合成引物要到信誉好的公司,拿到引物后要自己检测一下引物质量。

一师兄国内做TAIL-PCR总 ...

谢谢!
7楼2013-05-19 13:38:02
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
4楼: Originally posted by 十比 at 2013-05-10 17:28:20
Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。

这个是所有启动子都能克隆吗?这个引物怎么设计?我看着好像是做突变体插入序列的
8楼2014-04-07 19:04:56
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)

请问楼主P出来没,用的什么方法啊,求指教
9楼2014-04-07 19:05:49
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十比

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
8楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-07 19:04:56
这个是所有启动子都能克隆吗?这个引物怎么设计?我看着好像是做突变体插入序列的...

你已知的序列相当于T-DNA序列,同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。
10楼2014-04-09 19:44:39
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