TAIL-PCR克隆基因的启动子 - 动植物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2014-04-09 20:46:28

Cynthiaxin

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10楼: Originally posted by 十比 at 2014-04-09 19:44:39
你已知的序列相当于T-DNA序列，同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。...

反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的，还是直接用刘老师设计的这四个引物？能详细给我讲一下吗？谢谢啦

12楼2014-04-09 23:32:35

十比

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12楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-09 23:32:35
反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的，还是直接用刘老师设计的这四个引物？能详细给我讲一下吗？谢谢啦...

直接合成用就行，特异引物根据你已知的序列设计。有人用这些引物还扩过真菌的。

13楼2014-04-12 15:22:48

晨曦沛

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楼主启动子克隆成功木有？

14楼2014-08-31 15:16:26

踩到幸福了

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11楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 20:46:28
做genome walking也可以克隆启动子嘛

我用的genome walking 的方法不知道你说的是用的盒子还是自己设计的，我现在一直做不出来，求详谈

你具体是如何设计上游随机引物的，PCR体系如何。我的联系方式Q674144159，真心求教

15楼2015-10-15 14:59:14

annwt

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建议，反向pCR需要稀释模板底物，连接时最好过夜，4°

16楼2015-10-15 18:45:17