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Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做genome walking也可以克隆启动子嘛

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-04-09 20:46:28
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 十比 at 2014-04-09 19:44:39
你已知的序列相当于T-DNA序列,同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。...

反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的,还是直接用刘老师设计的这四个引物?能详细给我讲一下吗?谢谢啦
12楼2014-04-09 23:32:35
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十比

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-09 23:32:35
反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的,还是直接用刘老师设计的这四个引物?能详细给我讲一下吗?谢谢啦...

直接合成用就行,特异引物根据你已知的序列设计。 有人用这些引物还扩过真菌的。
13楼2014-04-12 15:22:48
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晨曦沛

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主启动子克隆成功木有?
14楼2014-08-31 15:16:26
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踩到幸福了

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 20:46:28
做genome walking也可以克隆启动子嘛

我用的genome walking 的方法不知道你说的是用的盒子 还是自己设计的 ,我现在一直做不出来,求详谈你具体是如何设计上游随机引物的,PCR体系如何  。我的联系方式Q674144159,真心求教
15楼2015-10-15 14:59:14
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annwt

木虫 (正式写手)

建议,反向pCR需要稀释模板底物,连接时最好过夜,4°
16楼2015-10-15 18:45:17
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