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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » TAIL-PCR克隆基因的启动子
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做genome walking也可以克隆启动子嘛

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-04-09 20:46:28
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by 十比 at 2014-04-09 19:44:39
你已知的序列相当于T-DNA序列，同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。...

反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的，还是直接用刘老师设计的这四个引物？能详细给我讲一下吗？谢谢啦
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12楼2014-04-09 23:32:35
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十比

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-09 23:32:35
反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的，还是直接用刘老师设计的这四个引物？能详细给我讲一下吗？谢谢啦...

直接合成用就行，特异引物根据你已知的序列设计。 有人用这些引物还扩过真菌的。
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13楼2014-04-12 15:22:48
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晨曦沛

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主启动子克隆成功木有？
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14楼2014-08-31 15:16:26
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踩到幸福了

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 20:46:28
做genome walking也可以克隆启动子嘛

我用的genome walking 的方法不知道你说的是用的盒子 还是自己设计的 ，我现在一直做不出来，求详谈你具体是如何设计上游随机引物的，PCR体系如何  。我的联系方式Q674144159，真心求教
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15楼2015-10-15 14:59:14
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annwt

木虫 (正式写手)
建议，反向pCR需要稀释模板底物，连接时最好过夜，4°
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16楼2015-10-15 18:45:17
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