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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » TAIL-PCR克隆基因的启动子
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云卷云舒啊

新虫 (小有名气)

[交流] TAIL-PCR克隆基因的启动子 已有7人参与

打算用TAIL-PCR克隆基因的启动子，但不知随机兼并引物（AD PRIMER）如何设计，请高手赐教
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1楼 2013-05-08 17:38:33
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十比

木虫 (著名写手)
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看一下华南农刘耀光的文章。
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2楼2013-05-09 07:48:38
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十比

木虫 (著名写手)
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Liu Y-G* and Chen Y (2007) High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. BioTechniques 43, 649-656. 这是他改进后发的文章。
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云卷云舒啊
4楼2013-05-10 17:28:20
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十比

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8楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-07 19:04:56
这个是所有启动子都能克隆吗？这个引物怎么设计？我看着好像是做突变体插入序列的...

你已知的序列相当于T-DNA序列，同理设计引物就行。另外楼上有人建议的反向PCR也可以试试。
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10楼2014-04-09 19:44:39
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十比

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12楼: Originally posted by Cynthiaxin at 2014-04-09 23:32:35
反向PCR效率不高。请问简并引物是怎么设计的，还是直接用刘老师设计的这四个引物？能详细给我讲一下吗？谢谢啦...

直接合成用就行，特异引物根据你已知的序列设计。 有人用这些引物还扩过真菌的。
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13楼2014-04-12 15:22:48
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