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crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 绝对定量荧光PCR中做标准曲线的DNA的获得。

虫友们好,最近我想用16SRNA做一下土壤总DNA的 绝对定量荧光PCR,在这之前要做一条标准曲线,我就想问一下,做标准曲线时的已知浓度的DNA是怎么获得的?而且我接下来做的是从土壤中提取的中DNA的16sRNA的荧光定量PCR,因此我做标准曲线的一直浓度的DNA有什么要求吗?请大家帮帮忙。或者给我相应的参考文献也可以,谢谢大家。
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丹66

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
您好,我最近也在做土壤微生物QPCR,但是困在了标曲这块,想请问您一些关于制作标曲的问题!我理解的制作标曲的步骤是:提取土壤基因组;引物扩增;扩增片段与载体连接转入感受态中;从中筛选几个阳性克隆去测序。我想请教的是,这个方法对不?另外为什么要筛选几个阳性克隆?希望您能指导一下,另外希望您给帮忙推荐几篇详细介绍的文章,嘿嘿……

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8楼2014-11-29 19:54:55
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