24小时热门版块排行榜    

查看: 4179  |  回复: 10
本帖产生 1 个 MicEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
crazymouse66: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 真的非常感谢,我以前都没做过这个,所以对此很不熟悉,谢谢你的帮助,让我大概有了一些了解,我先自己再查阅一些文献,有不懂的再请教您,谢谢啊。 2013-05-07 11:20:07
zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, good 2013-05-10 16:27:48
zhang8826857: 有兴趣来做本版的专家吗? 2013-05-10 16:28:12
这个最好是用带有目的片段的质粒作标准曲线,因为质粒相对稳定,不易降解。你首先要选择一个16s rDNA序列测定完毕的纯菌,你可以从的环境样品中随便分离一个细菌,用高保真酶扩增16s rDNA保守区域(比如V3区),然后通过连接载体转化后测序,然后你就知道这个片段(V3)的精确大小了。然后,重新用扩增那个细菌的这个片段(V3),pcr产物连接合适的载体(单克隆质粒,并只有一个克隆位点的),连接成功后转化,摇菌培养,然后从摇好的菌液中再提取这个带有目的片段质粒。下一步就是测定质粒的浓度和纯度了,测OD值即可,一般来说260nm吸光度下,1OD≈50mg/mL双链DNA,这样你就知道了你提取的带有目的片段的质粒的浓度了。因为载体的大小和目的片段(那个V3区)大小都已知,然后通过公式即可算出质粒的拷贝数,这个质粒的拷贝数和目的片段的拷贝数是一样的。最后,将这个质粒进行5倍或是10倍的梯度稀释,用这一系列的质粒上机荧光定量PCR做标准曲线就行了。
早上比较忙,介绍的有点混乱,不好意思
2楼2013-05-07 09:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

相关版块跳转 我要订阅楼主 crazymouse66 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 9/450 2026-08-17 14:59 by wangze12014
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +33 医学老男孩 2026-08-13 80/4000 2026-08-17 14:40 by yq199112088
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +3 angus9576 2026-08-17 6/300 2026-08-17 14:32 by 启萌科技
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 6/300 2026-08-17 13:58 by EYK67XJMj64E
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 13:49 by EYK67XJMj64E
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见