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njulifeng

铜虫 (初入文坛)

[求助] 液相色谱出现这样奇怪的峰形,怎么处理?

我用Phenomenex的柱子(synergi 4u Hydro-RP 80A)分析pyrithione,用的是0.17%的甲酸和乙腈的流动相。大半年了峰形都挺好。前段时间实验室搬家,柱子和HPLC都空闲了一段时间。重新开始做实验之后,发现峰形不正常了,经过排查,应该是柱子的问题。怀疑点有二:一是排气泡不完全,柱子进气泡了;二是长时间使用甲酸导致柱子退化。

问题到底在哪里以及怎样处理,并不清楚,在此请教。多谢。

色谱图见附件。

图片1.png
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gen.wang

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
排除一切实验中可能出现的问题,你的柱子要退休了!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-04-23 08:42:58
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zhouyu228

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
柱子活化一下 用甲酸和已经分别冲洗半小时
3楼2013-04-23 10:38:53
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swallow13

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2013-04-23 10:45:53
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bomblei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西湖醉鱼: 金币+1, 欢迎常来分析版 2013-04-24 14:43:54
估计你的柱子要挂。你用纯乙腈从最小流速到大流速冲一下,可以排汽泡,然后再用乙腈多冲一会柱子,试试吧。
多请教,多学习!
5楼2013-04-23 11:21:58
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njulifeng

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-23 10:45:53
既然大半年都没问题 那么HPLC的常规操作应该是没问题 我想lz首先可以从色谱柱和色谱系统污染着手 从谱图编号看 是第一次进样的图 多冲洗一下系统试试 再不行就要考虑是不是色谱柱的问题了

这不是第一张图,前几天也做过同样的图。已经用纯乙腈小流速冲了一整夜了,还是这样。换过新药品试过,换过HPLC仪器,都是一样。奇怪的是,我换了另外两根不同的柱子试过,很旧的一根柱子峰形是好的,但是没走出第三个峰,新买的一根柱子竟然走出的峰形也是类似。昨天怀疑是柱子有问题,现在又犹豫了。
6楼2013-04-23 12:15:57
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swallow13

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

7楼2013-04-23 12:29:36
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njulifeng

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-23 12:29:36
如果换过色谱柱试过 那就基本可以肯定是柱子的问题了 例如柱头出现了塌陷 当然 另外还有一个可能就是你的样品不纯 所以两根新柱都分出两个峰 可以按照色谱柱的报告单上的方法进一个标样试试 ...

不是的,换了两根色谱柱,其中一根新买的柱子走出来的峰形也是有问题的,这根新柱子应该是好的。
8楼2013-04-23 13:34:25
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gwwgww5566

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同意2楼看法,柱子该退休了,在怎么活化啥的柱效肯定不如以前了。
自信&真诚
9楼2013-04-23 13:40:21
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by njulifeng at 2013-04-23 13:34:25
不是的,换了两根色谱柱,其中一根新买的柱子走出来的峰形也是有问题的,这根新柱子应该是好的。...

可能本来就是两个峰,有的时候讲解很快的,还没金阳就降解了,那么你看看你每次进样的时间是不是都差不多,柱子应该是好的
10楼2013-04-23 14:17:01
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