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zhangyonghu

木虫 (小有名气)


[交流] AFLP这样的结果是怎么回事

我的DNA是最右边的6个,中间是酶切连接,左边是欲扩,现在结果如图


这是怎么回事啊 ?
大神们给看看吧

未命名.jpg
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liulei198477

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-03-26 04:21:35
1949stone: 回帖置顶 2013-03-26 07:42:00
预扩产物跑聚丙烯酰胺胶了吗?不知道你用什么酶组合?酶切和连接看着还可以。我觉得可能原因有这么几个:
1、继续稀释你的连接产物做预扩。
2、循环数有问题,做个循环梯度,在18-25之间。
3、Mg离子做个梯度。
如果还不行,那只能从新做酶切和连接,连接很关键。
6楼2013-03-25 23:05:49
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普通回帖

liugs

禁虫 (正式写手)


zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

2楼2013-03-25 09:54:58
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by liugs at 2013-03-25 09:54:58
感觉预扩增片段稍大!
电泳是采用什么染色方法?是电泳前加的染色,还是电泳之后染色?

是用的核算染料染的,溶胶的时候加的,
你觉得是什么原因导致的欲扩片段偏大呢,我的酶切连接的结果怎么样啊?
谢谢
4楼2013-03-25 19:44:44
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by liulei198477 at 2013-03-25 23:05:49
预扩产物跑聚丙烯酰胺胶了吗?不知道你用什么酶组合?酶切和连接看着还可以。我觉得可能原因有这么几个:
1、继续稀释你的连接产物做预扩。
2、循环数有问题,做个循环梯度,在18-25之间。
3、Mg离子做个梯度。
...

欲扩没有跑聚丙烯酰胺胶,我的是PstI,MseI组合。
连接产物也需要稀释么?
我现在是30个循环
7楼2013-03-26 06:45:02
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schkk

至尊木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
预扩产物偏大,增长点酶切时间试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-03-26 12:54:49
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by schkk at 2013-03-26 12:54:49
预扩产物偏大,增长点酶切时间试试

我是酶切链接一步法,用了16个小时
9楼2013-03-26 19:07:49
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liulei198477

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做一下循环梯度吧,从18-25
10楼2013-03-26 21:28:17
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简单回复
haixiawu3楼
2013-03-25 14:40   回复  
zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
fyz72325楼
2013-03-25 20:07   回复  
zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
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