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feixiosng51

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助】同一个样品用两种液相色谱条件检测的结果不一致?怎么回事? 已有11人参与

同一个样品两种方法检测结果不一致
请教大家,同一个样品用两种液相色谱条件检测的结果不一致(归一化法),一个色谱条件是乙腈-0.1%磷酸=40:60,主峰保留时间为4min,杂质A 含量约0.15%。另一个是乙腈-水(0.4%HAC,0.1%TEA)=44:56,主峰为16min,采集时间足够长,完全可以检测到A,但是杂质A 没有出峰。柱子都是C18柱,牌子不一样。
另一个问题,做旋光测试时,同一份样品用两根长度不一样的旋光管,测出来结果偏差比较大,可能是什么原因?另外,同一批样品,配制两份溶液,旋光值测出来也不一样,为什么呢?
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novus

铁杆木虫 (著名写手)

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karl2100(金币+1): 多谢指教! 2011-03-09 20:12:17
个人认为是因为楼主所用的流动相不同导致杂质未检出。
添加无机酸磷酸的流动相本身紫外吸收比较弱,故能看到较小的杂质(0.15%),但换为添加有机酸(HAC)碱(TEA)后的流动相,本身紫外吸收增强了很多,可能会掩盖小杂质的检出,也就是说该杂质的检测限变高了,所以看不到。
别太放肆,没什么用!
8楼2011-03-09 20:03:56
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普通回帖

feixiosng51

铁虫 (小有名气)

补充:检测波长244nm,pH值分别为2.4,4.3
2楼2011-03-09 11:28:08
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bronzezt

至尊木虫 (职业作家)

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karl2100(金币+1): 谢谢! 2011-03-09 19:53:06
1.有可能是柱子的原因 不同柱子有些杂质是不能检测到,你可以试试两个流动相下 同一柱子是否出现这种情况,以排除是否柱子的原因。
2.  [a](t,D)=  100a/LC   
L为测定管长度,dm;
α 为测得的旋光度;
c 为每100ml溶液中含有被测物质的重量,g(按干燥品或无水物计算)可见比旋度与管长有关。
3楼2011-03-09 13:57:44
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38726150

铁虫 (小有名气)

学习了。
4楼2011-03-09 16:40:48
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hongqianqian

银虫 (小有名气)


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流动相条件不同,杂质很可能就不能被洗脱下来~
快乐多多,好运多多~
5楼2011-03-09 16:47:37
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cjl2fl

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得是流动相的跟换引起杂质的响应变小,或有变化
6楼2011-03-09 17:02:34
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小丁不识木木

新虫 (初入文坛)

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karl2100(金币+1): 谢谢参与讨论! 2011-03-09 19:53:47
短一点的柱子是不是没有完全分离呢   长柱子如果完全分离了  结果可能就有很大偏差了吧
7楼2011-03-09 17:32:42
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xlingjuan

铜虫 (小有名气)

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karl2100(金币+1): 多谢指教! 2011-03-13 23:13:11
引用回帖:
Originally posted by novus at 2011-03-09 20:03:56:
个人认为是因为楼主所用的流动相不同导致杂质未检出。
添加无机酸磷酸的流动相本身紫外吸收比较弱,故能看到较小的杂质(0.15%),但换为添加有机酸(HAC)碱(TEA)后的流动相,本身紫外吸收增强了很多,可能会 ...

楼上说的极是,基线噪音增大后,检测线高才能检测得到。
另外,从LZ的实验看来,A物质可能属于碱性物质;若其杂质也是碱性的话(有可能),在能检测到的情况下,出峰时间也比14min更晚,这个时候,峰宽会比较大,甚至在试验条件下不成峰型,不能辨别出来。

当然,也有可能杂质包裹在A峰里呢。

另外 1. 调整下第二个流动相看看,加强洗脱强度,看怎样。
     2. 加大进样量

问一下,杂质出峰时间在A前还是A后?
9楼2011-03-13 12:10:51
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许灵艳-1230

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
所用的色谱柱一样长吗?可能磷酸对你的样品洗脱能力很强
10楼2011-12-26 15:50:21
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