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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » AFLP这样的结果是怎么回事
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

[交流] AFLP这样的结果是怎么回事

我的DNA是最右边的6个，中间是酶切连接，左边是欲扩，现在结果如图


这是怎么回事啊 ？
大神们给看看吧

未命名.jpg
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1楼 2013-03-25 08:27:26
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liugs

禁虫 (正式写手)
★
zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
2楼2013-03-25 09:54:58
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liugs at 2013-03-25 09:54:58
感觉预扩增片段稍大！
电泳是采用什么染色方法？是电泳前加的染色，还是电泳之后染色？

是用的核算染料染的，溶胶的时候加的，
你觉得是什么原因导致的欲扩片段偏大呢，我的酶切连接的结果怎么样啊？
谢谢
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4楼2013-03-25 19:44:44
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liulei198477

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-03-26 04:21:35
1949stone: 回帖置顶 2013-03-26 07:42:00
预扩产物跑聚丙烯酰胺胶了吗？不知道你用什么酶组合？酶切和连接看着还可以。我觉得可能原因有这么几个：
1、继续稀释你的连接产物做预扩。
2、循环数有问题，做个循环梯度，在18-25之间。
3、Mg离子做个梯度。
如果还不行，那只能从新做酶切和连接，连接很关键。
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6楼2013-03-25 23:05:49
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liulei198477 at 2013-03-25 23:05:49
预扩产物跑聚丙烯酰胺胶了吗？不知道你用什么酶组合？酶切和连接看着还可以。我觉得可能原因有这么几个：
1、继续稀释你的连接产物做预扩。
2、循环数有问题，做个循环梯度，在18-25之间。
3、Mg离子做个梯度。
...

欲扩没有跑聚丙烯酰胺胶，我的是PstI,MseI组合。
连接产物也需要稀释么？
我现在是30个循环
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7楼2013-03-26 06:45:02
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schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
预扩产物偏大，增长点酶切时间试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2013-03-26 12:54:49
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by schkk at 2013-03-26 12:54:49
预扩产物偏大，增长点酶切时间试试

我是酶切链接一步法，用了16个小时
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9楼2013-03-26 19:07:49
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liulei198477

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做一下循环梯度吧，从18-25
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10楼2013-03-26 21:28:17
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haixiawu3楼
2013-03-25 14:40   回复  
zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
fyz72325楼
2013-03-25 20:07   回复  
zhangyonghu(金币+1): 谢谢参与
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