应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA提取的求助
41/1返回列表
查看: 694  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

沙漠肥牛

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNA提取的求助

各位大神，求助！最近在做病毒的RNA提取实验，实际上，本人算是第一次接触分子实验，水平有点渣。用的是试剂盒提取，做了挺多次的了吧，有时候PCR能出来，有时候不能。测OD的结果显示，260/280很多在1.5-1.7左右，甚至1.4的都有，好像说是蛋白质污染严重？？想问下，这个情况大概是什么原因啊？还有，这个情况我应该注意什么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-14 16:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
沙漠肥牛: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-15 08:40:03
测OD的结果并不能说明什么

最好做电泳(琼脂糖凝胶电泳),看是否三条带.28S,18S,5S.且5S最弱.
如果RNA质量好，28S和18S的比例大约是2：1.

我用过promega公司的.
不过现在
我们实验用常规的方法TRIzol来提取RNA.


蛋白污染：
裂解 Buffer中加新鲜样品不能太多，也不能太少。太多裂解不充分，太少得率少。
       
特别是在转移新管时,不能碰到沉淀。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-14 17:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolaiyefeng

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-14 17:35:47
测OD的结果并不能说明什么

最好做电泳(琼脂糖凝胶电泳),看是否三条带.28S,18S,5S.且5S最弱.
如果RNA质量好，28S和18S的比例大约是2：1.

我用过promega公司的.
不过现在
我们实验用常规的方法TRIzol来提取R ...

你好，我近期想做RNA提取，能把你的提取具体步骤分享下么，十分感谢！！！
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-30 16:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyu0355

木虫 (正式写手)
应用TRIzol LS提取病毒RNA
所提取物为血清、血液、细胞培养液、鸡胚尿囊液等液体中的病毒。提取时尽量在人少时进行，防止空气中RNA酶的污染。所用一切物品也应是无RNA酶的。
1.1 在1.5ml的eppendorf管中加入病毒原液500ul，再加入TRIzol LS 500ul，充分混匀，室温放置10min。
1.2 加入200ul的氯仿，盖紧离心管盖，用力震荡离心管（溶液充分乳化，成乳白状，无分相现象），室温放置10min （由于氯仿沸点低、易挥发，振荡时离心管可能爆开，小心）。
1.3 离心 4℃、13000r/min、15min，取上层液相移入另一管（切忌吸动白色中间相）。
1.4 加入等体积异丙醇，轻轻颠倒离心管充分混匀液体，室温放置10min。
1.5 离心 4℃、13000r/min、15min，（这时乍一看会发现管子里好像没有东西，再仔细看看，会发现靠近管底的壁上有一星点的白色沉淀物，就是它了）用枪小心吸去所有上清。
1.6 1ml75%乙醇洗一遍，离心 4℃、8000r/min、10min，（这时又会发现管子没东西了，不要担心，有的，但是因为量太少看不见罢了）用枪小心吸去所有上清，在超净台中干燥5min。
1.7 加入适量DEPC处理水。（如果材料来源丰富的话，加入的水量为下一步RT的total减去其他试剂的量；若要省着点用，则自己看着办了，尽量不要加太多的水）。
1.8 建议立即做RT。若要保存，可在上一步加入乙醇后冻存于－70℃，可保存一年；若加入DEPC水后则只能在－20℃保存1个月左右。
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-31 09:51:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 沙漠肥牛 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭