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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】费了一整天提取的RNA
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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[交流] 【求助/交流】费了一整天提取的RNA 已有13人参与


已经扔到垃圾桶了，太心碎了。。。

提取的一种海藻的RNA，用的trizol手提的。
跑胶跑了40分钟左右的。
过程中，很注意很注意。理论上保证没有RNAase污染。。。

[ Last edited by fungixx on 2010-5-17 at 09:51 ]
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
1楼 2010-05-16 21:38:51
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-17 04:46:48
fungixx(金币+1): 2010-05-17 09:56:32
不知道是何种组织？
建议选用TRizol 或QIAGEN RNeasy plus mini kit
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2楼2010-05-16 21:57:11
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小白兄

金虫 (小有名气)
fungixx(金币+1):肯定会有RNase污染，只是不知道啥时候污染的。。。 2010-05-17 09:57:09
有拖带，是不是没提出来啊，会不会RNA酶污染啊
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时光如流水，匆匆而过。
3楼2010-05-16 22:42:42
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小神300

新虫 (初入文坛)
★ ★
plantaqp(金币+2):欢迎交流 2010-05-17 04:46:59
fungixx(金币+1):跑了40 分钟吧，刚开始用的100V，后来用的80V，2%胶。是新配的，槽子用3%双氧水跑过，所有的水都是DEPC水。。。还有什么？ 2010-05-17 09:55:24
最近刚好也在提RNA，不一定是你没有提出来，也有可能是在电泳过程中出现的问题。看你的电泳宽度，跑了多久啊，感觉时间有点长。我一般1%的胶跑10~15min，而且跑RNA的胶都是新配的，而且用到的电泳槽，配胶用的东西都会用新配的TAE洗一下。

[ Last edited by 小神300 on 2010-5-17 at 00:12 ]
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4楼2010-05-17 00:08:46
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风采依旧135

新虫 (正式写手)
心平气和
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风采依旧!!!
5楼2010-05-17 08:19:51
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四裤全输

木虫 (著名写手)
别急别急

瓶颈，过了就好了
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impossible is also i'm possible
6楼2010-05-17 09:09:37
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jasco

木虫 (正式写手)
蛋白，基因组污染，你提的什么样品？
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7楼2010-05-17 09:23:09
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yinsongna

金虫 (正式写手)
提的什么组织？用什么提的，楼主说清楚一下 大家好给你分析
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8楼2010-05-17 09:42:05
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liyong1981

金虫 (正式写手)
提的不咋的
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9楼2010-05-17 11:28:04
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢分享经验 2010-05-17 13:10:49
fungixx(金币+1):你说的挺有道理，谢谢了 2010-05-17 13:11:48
就算你RNA提取的非常好但跑电泳跑40分钟也基本Over了，如果你跑不了变性胶那而用普通的琼脂糖胶代替了，那建议你用小槽子跑，电压尽量放大，跑的时间尽量缩短，具体的时间要根据你槽子的大小来。标准就是肉眼看到染色的带已经跑出来了并且分开了就可以了，再跑就有大量被降解的可能了。
再有，你提取的是蓝藻类是属于植物的RNA类，虽然蓝藻没有叶绿素的污染，但多酚多糖会是RNA提取过程中的一个影响因素，建议你在提取RNA之前样本先去除植物杂质，然后再提取RNA。
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10楼2010-05-17 12:50:40
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