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梦羽89

新虫 (初入文坛)

[求助] 共表达酶的优化问题

老板让做共表达质粒的产木聚糖酶和葡萄糖醛酸酶的优化,一个质粒是PET-20b-xynB-PHsh-aguA,另外一个是PET-20b-xynB-rbs-aguA(注:xynB为木聚糖酶,aguA为葡萄糖醛酸酶),区别就是前一个质粒两个启动子,可以调节产酶比例。我的实验目的就是通过优化使得两种酶的产量高,并且还要使得两种酶的产酶比例最佳,也就是酶解效率高。现在已经做完不同诱导条件的单因素优化(诱导剂种类,诱导剂浓度,诱导时间,诱导温度等),但是产酶量高的酶解效率不高,酶解效率好的吧,产酶量又低。请问有哪位大侠提示一下,接下来我该设计怎养的思路才能继续讲实验进行下去?
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biosci

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是有要求要用活菌催化反应吗?还是出来后,破碎上清液催化
2楼2013-03-12 09:17:29
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梦羽89

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2013-03-12 09:17:29
你是有要求要用活菌催化反应吗?还是出来后,破碎上清液催化

我是破细胞取上清啊
3楼2013-03-12 14:55:08
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


【答案】应助回帖

那分别表达不行?非得弄到一个细胞里面吗?
4楼2013-03-14 10:22:29
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梦羽89

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biosci at 2013-03-14 10:22:29
那分别表达不行?非得弄到一个细胞里面吗?

老板就是想通过不同启动子来控制双酶的表达,分别表达就没有创新性了
5楼2013-03-14 13:32:27
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2013-03-15 08:18:49
取决于你对比例的要求是否严格,如果只是特定的要求1比2的简单倍数,可考虑将基因简单重复倍加串联起来。也可以考虑加入GFP在复合酶上或者单一酶上,以测定荧光度检测复合酶或者单一酶的表达程度。达到一定程度加入抑制剂即可。
6楼2013-03-14 20:15:17
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