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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 共表达酶的优化问题
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梦羽89

新虫 (初入文坛)

[求助] 共表达酶的优化问题

老板让做共表达质粒的产木聚糖酶和葡萄糖醛酸酶的优化，一个质粒是PET-20b-xynB-PHsh-aguA，另外一个是PET-20b-xynB-rbs-aguA（注：xynB为木聚糖酶，aguA为葡萄糖醛酸酶），区别就是前一个质粒两个启动子，可以调节产酶比例。我的实验目的就是通过优化使得两种酶的产量高，并且还要使得两种酶的产酶比例最佳，也就是酶解效率高。现在已经做完不同诱导条件的单因素优化（诱导剂种类，诱导剂浓度，诱导时间，诱导温度等），但是产酶量高的酶解效率不高，酶解效率好的吧，产酶量又低。请问有哪位大侠提示一下，接下来我该设计怎养的思路才能继续讲实验进行下去？
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1楼 2013-03-11 21:00:32
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是有要求要用活菌催化反应吗？还是出来后，破碎上清液催化
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2楼2013-03-12 09:17:29
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梦羽89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2013-03-12 09:17:29
你是有要求要用活菌催化反应吗？还是出来后，破碎上清液催化

我是破细胞取上清啊
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3楼2013-03-12 14:55:08
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

那分别表达不行？非得弄到一个细胞里面吗？
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4楼2013-03-14 10:22:29
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梦羽89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biosci at 2013-03-14 10:22:29
那分别表达不行？非得弄到一个细胞里面吗？

老板就是想通过不同启动子来控制双酶的表达，分别表达就没有创新性了
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5楼2013-03-14 13:32:27
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2013-03-15 08:18:49
取决于你对比例的要求是否严格，如果只是特定的要求1比2的简单倍数，可考虑将基因简单重复倍加串联起来。也可以考虑加入GFP在复合酶上或者单一酶上，以测定荧光度检测复合酶或者单一酶的表达程度。达到一定程度加入抑制剂即可。
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6楼2013-03-14 20:15:17
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