应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达一个酶的催化亚基，要求有活性
61/1返回列表
查看: 887  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nmhsd

木虫 (正式写手)

[交流] 表达一个酶的催化亚基，要求有活性

实验所需，要做一个酶的表达。要求表达的这个酶有生物活性，易分离提取，预算问题暂不予考虑。本实验室有Sf-9昆虫细胞系，其他表达载体等均需购买。现主要有以下问题。
1选用什么样的表达系统，大肠杆菌？酵母？昆虫杆状病毒？还是逐一去尝试？
2表达载体那些可以去找人要，有些必须从公司购买？
另外实验周期不要太长，没有太多时间了，尽量能在2个月之内完成。不知做过表达的前辈们能否指教小弟一二。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-14 22:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:43:23
nmhsd: 金币+3, 大肠杆菌确实太容易表达了，刚做了，只可惜都是包涵体，没活性 2012-10-01 00:17:50
个人觉得，表达系统可以先试试大肠杆菌的，如果能表达就最好了，毕竟其他两个系统相对麻烦。
载体，你可以拿自己实验室的先构建，需要的但是没有的就和别人交换，实在不行只能买商业化的了。
昆虫细胞，周期太长了啊。不顺利的话，还不知道什么时候出来，酵母我没做过，大肠杆菌的做的比较多，毕竟比较成熟，周期短。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-16 09:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:43:36
nmhsd: 金币+5, 谢谢 2012-10-01 00:18:19
我认为要有活性用昆虫sf9细胞表达较好，因为真核表达系统有正确的折叠和修饰，对活性的维持有一定的作用。大肠杆菌好像容易形成包涵体，个人感觉比较麻烦。呵呵
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-16 09:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-16 09:11:05
个人觉得，表达系统可以先试试大肠杆菌的，如果能表达就最好了，毕竟其他两个系统相对麻烦。
载体，你可以拿自己实验室的先构建，需要的但是没有的就和别人交换，实在不行只能买商业化的了。
昆虫细胞，周期太长了 ...

找同学要了一个pET-20a，及BL21大肠杆菌，正在构建载体，同时订购了Bac-to-Bac系统，估计一个月才能到货。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-19 22:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-07-16 09:29:22
我认为要有活性用昆虫sf9细胞表达较好，因为真核表达系统有正确的折叠和修饰，对活性的维持有一定的作用。大肠杆菌好像容易形成包涵体，个人感觉比较麻烦。呵呵

时间不等人啊，直接订购了Bac-to-Bac表达系统。等试剂期间打算先用大肠杆菌表达一下
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-19 22:04:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
nmhsd: 金币+1 2012-10-10 18:12:24
引用回帖:
5楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 22:04:19
时间不等人啊，直接订购了Bac-to-Bac表达系统。等试剂期间打算先用大肠杆菌表达一下...

你大肠杆菌用低温诱导的么，改改条件，如果还是那样的话就只能用Bac-to-Bac表达系统了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-01 19:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nmhsd 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭