应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达一个酶的催化亚基，要求有活性
51/1返回列表
查看: 857  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)

[交流] 表达一个酶的催化亚基，要求有活性

实验所需，要做一个酶的表达。要求表达的这个酶有生物活性，易分离提取，预算问题暂不予考虑。本实验室有Sf-9昆虫细胞系，其他表达载体等均需购买。现主要有以下问题。
1选用什么样的表达系统，大肠杆菌？酵母？昆虫杆状病毒？还是逐一去尝试？
2表达载体那些可以去找人要，有些必须从公司购买？
另外实验周期不要太长，没有太多时间了，尽量能在2个月之内完成。不知做过表达的前辈们能否指教小弟一二。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-14 22:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-16 09:11:05
个人觉得，表达系统可以先试试大肠杆菌的，如果能表达就最好了，毕竟其他两个系统相对麻烦。
载体，你可以拿自己实验室的先构建，需要的但是没有的就和别人交换，实在不行只能买商业化的了。
昆虫细胞，周期太长了 ...

找同学要了一个pET-20a，及BL21大肠杆菌，正在构建载体，同时订购了Bac-to-Bac系统，估计一个月才能到货。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-19 22:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:43:23
nmhsd: 金币+3, 大肠杆菌确实太容易表达了，刚做了，只可惜都是包涵体，没活性 2012-10-01 00:17:50
个人觉得，表达系统可以先试试大肠杆菌的，如果能表达就最好了，毕竟其他两个系统相对麻烦。
载体，你可以拿自己实验室的先构建，需要的但是没有的就和别人交换，实在不行只能买商业化的了。
昆虫细胞，周期太长了啊。不顺利的话，还不知道什么时候出来，酵母我没做过，大肠杆菌的做的比较多，毕竟比较成熟，周期短。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-16 09:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:43:36
nmhsd: 金币+5, 谢谢 2012-10-01 00:18:19
我认为要有活性用昆虫sf9细胞表达较好，因为真核表达系统有正确的折叠和修饰，对活性的维持有一定的作用。大肠杆菌好像容易形成包涵体，个人感觉比较麻烦。呵呵
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-16 09:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-07-16 09:29:22
我认为要有活性用昆虫sf9细胞表达较好，因为真核表达系统有正确的折叠和修饰，对活性的维持有一定的作用。大肠杆菌好像容易形成包涵体，个人感觉比较麻烦。呵呵

时间不等人啊，直接订购了Bac-to-Bac表达系统。等试剂期间打算先用大肠杆菌表达一下
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-19 22:04:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +13 Lanmanbaby 2026-08-09 21/1050 2026-08-10 14:16 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 国自然结果 +3 Vierhys 2026-08-10 5/250 2026-08-10 12:53 by lliang1209
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +10 archvillain 2026-08-04 12/600 2026-08-10 12:45 by yudaoqian88
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] FileCode能看出啥？ +3 要乐观耀哥 2026-08-10 6/300 2026-08-10 12:33 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭