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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取的特殊现象
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cuicchao

金虫 (正式写手)

[交流] 质粒提取的特殊现象

这是我在同一次提取质粒时出现的现象，用的是OMEGA的试剂盒。

DSC03382.JPG



DSC03384.JPG
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1楼 2013-03-09 08:16:30
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cuicchao

金虫 (正式写手)
本来正常现象应该是第二幅图的样子，第一个明显没裂解开菌体，这怎么回事，我想是不是挑的大肠杆菌单克隆不对劲啊！？？？？
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2楼2013-03-09 08:19:22
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无为书生

铁虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuicchao at 2013-03-09 08:19:22
本来正常现象应该是第二幅图的样子，第一个明显没裂解开菌体，这怎么回事，我想是不是挑的大肠杆菌单克隆不对劲啊！？？？？

是不是菌养的太久了，对数期的最好提！
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3楼2013-03-09 08:56:33
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concon123456

铜虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
1.你的细菌量是不是有问题。这种试剂盒对细菌量有要求，多了列解不开的。
2.问：裂解液忘加了。嘿嘿
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4楼2013-03-09 09:06:06
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cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-09 08:56:33
是不是菌养的太久了，对数期的最好提！...

我一般都是摇12小时以上再提质粒，这样不好吗？之前我就是这样提取的
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5楼2013-03-09 09:23:53
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cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by concon123456 at 2013-03-09 09:06:06
1.你的细菌量是不是有问题。这种试剂盒对细菌量有要求，多了列解不开的。
2.问：裂解液忘加了。嘿嘿

SOLUTION 1,2,3都加了啊。菌量是挺多了，那之前也能提出来啊
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6楼2013-03-09 09:25:50
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无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cuicchao at 2013-03-09 09:23:53
我一般都是摇12小时以上再提质粒，这样不好吗？之前我就是这样提取的...

菌太久了裂解不充分，你看看加了裂解液后菌液是否会变澄清！
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7楼2013-03-09 09:35:25
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
离心收集菌体量会不会过多？我用的试剂盒一般是3ML每管收集菌体，基本上都可以按照试剂盒操作完全裂解。

另外会不会是忘记重悬直接加了裂解液？

也许是污染了什么东东。。。。。。

没有遇到过卤煮这样的情况，只是自己猜测，希望帮到卤煮
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9楼2013-03-09 12:18:05
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cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 逆天打酱油 at 2013-03-09 12:18:05
离心收集菌体量会不会过多？我用的试剂盒一般是3ML每管收集菌体，基本上都可以按照试剂盒操作完全裂解。

另外会不会是忘记重悬直接加了裂解液？

也许是污染了什么东东。。。。。。

没有遇到过卤煮这样的情 ...

恩，我想多提的时候是3ml的菌体裂解液上清结合到一个柱子上洗脱的，之前这样做挺顺的，就这次出现了这情况。
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12楼2013-03-09 20:17:00
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呆口小俊

金虫 (初入文坛)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
溶液三加完后把蛋白沉淀打散，用点力没事。你管子里应该还有蛋白质没沉吧？
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14楼2013-03-10 08:55:23
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
第一管里看起来像粘稠状蛋白
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15楼2013-03-10 09:01:14
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叶伟伟99

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌没裂解呢！加了溶液I没震荡吧？
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16楼2013-03-10 09:32:22
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cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 叶伟伟99 at 2013-03-10 09:32:22
菌没裂解呢！加了溶液I没震荡吧？

我加Solution1之后用枪吹打重悬起来就好了，然后再加solution2了
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17楼2013-03-10 09:47:03
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wanglei512

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果离心以后菌体发红，我们一般就不进行下面的操作了，因为根本提不出质粒，出现红色要么是污染了，要么摇的时间太长了
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18楼2013-03-10 10:14:48
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yingying15888楼
2013-03-09 09:53   回复  
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
钟沐霖10楼
2013-03-09 15:06   回复  
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
钟沐淋11楼
2013-03-09 15:10   回复  
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
yingying158813楼
2013-03-09 23:09   回复  
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