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jordanlang

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化的奇怪问题

从E.coli JM109中提取的质粒再转化到DH5α中却怎么都转不进去,质粒是pMD19-T,求各位高手帮助啊!!!
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jordanlang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-01 17:06:23
转不进去是什么意思?涂板过夜后没有克隆吗?
觉得可能的原因有:
1. 感受态是否正常?可以拿control plasmid试一下
2. 抗生素是否用错?
3. 提取质粒的浓度?有时候我们提出来质粒,用nanodrop测试三四十或者四 ...

就是过夜没有克隆。
感受态应该没问题,control正常
提的质粒也酶切验证了,没问题。
现在有一个问题就是质粒是公司合成的,pMD19-T-simple加上我需要的外源基因,pMD19-T-simple本身没有酶切位点,所以我只能用自己加的酶切位点验证,不知道载体本身有没有问题
8楼2013-03-02 07:49:25
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scilencing

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题可能出在你提取的质粒上,最好用质粒提取试剂盒来提取质粒。
2楼2013-03-01 10:44:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定感受态没有问题吗?
3楼2013-03-01 11:21:22
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jordanlang: 金币+1, 有帮助 2013-03-02 07:49:39
转不进去是什么意思?涂板过夜后没有克隆吗?
觉得可能的原因有:
1. 感受态是否正常?可以拿control plasmid试一下
2. 抗生素是否用错?
3. 提取质粒的浓度?有时候我们提出来质粒,用nanodrop测试三四十或者四五十ng/ul,但是酶切和测序却发现什么都没有。因此,是否已经检测提取出来的质粒是否正常?
4楼2013-03-01 17:06:23
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