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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌转化的奇怪问题
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jordanlang

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化的奇怪问题

从E.coli JM109中提取的质粒再转化到DH5α中却怎么都转不进去，质粒是pMD19-T，求各位高手帮助啊！！！
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1楼2013-03-01 10:23:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定感受态没有问题吗？
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3楼2013-03-01 11:21:22
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scilencing

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题可能出在你提取的质粒上，最好用质粒提取试剂盒来提取质粒。
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2楼2013-03-01 10:44:52
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jordanlang: 金币+1, ★有帮助 2013-03-02 07:49:39
转不进去是什么意思？涂板过夜后没有克隆吗？
觉得可能的原因有：
1. 感受态是否正常？可以拿control plasmid试一下
2. 抗生素是否用错？
3. 提取质粒的浓度？有时候我们提出来质粒，用nanodrop测试三四十或者四五十ng/ul，但是酶切和测序却发现什么都没有。因此，是否已经检测提取出来的质粒是否正常？
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4楼2013-03-01 17:06:23
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒浓度和质粒纯度都影响转化
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男人，就要对自己狠一点！
5楼2013-03-01 19:22:50
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