| 查看: 598 | 回复: 0 | |||
piscesghost金虫 (小有名气)
|
[求助]
酵母克隆PCR技术求助
|
|
本人最近在做酵母克隆PCR，现在是pPICZaA载体转入GS115，挑克隆于YPD中过夜后PCR鉴定，取约100ul菌液离心，用ddH2O重悬后先100度10min，然后-80度10min，重复3次，离心取上清PCR，但是最近一直P不出来，或者条带很浅，设置的程序是94度10min，94度45s，50度45s，72度1min，72度5min，35个循环。 请教做过酵母的高人指点，怎样才能做好酵母克隆的PCR鉴定？？ 因为克隆数较多，要筛选的数量也较多，直接提基因组工作量太大，而且菌落PCR鉴定也只是一个初筛。之前用pPIC9K转化的GS115和KM71时，做菌落PCR基本能P出条带，但是现在突然P不出来了，所用冻融条件，PCR体系，程序等等条件都基本一致。还请高人指点，不胜感激！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有300人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
关于克隆技术——pcr产物测序问题
已经有16人回复
- 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
已经有31人回复
- 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
已经有13人回复
- 酵母菌落PCR的方法
已经有15人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 重叠PCR克隆大片段
已经有4人回复
- 亲们~谁做过酿酒酵母的转化，怎么筛选阳性克隆呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增
已经有32人回复
- 【求助/交流】分类鉴定的时候，为什么pcr之后还要做TA克隆，转化，然后将序列测序呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于酵母菌落PCR
已经有8人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
10