| 查看: 1830 | 回复: 13 | |||
[交流]
有经验的虫友帮我分析下两次western blot 的结果吧，望指点
|
|||
|
最近做western blot，抗体买的是博士德公司的一抗和二抗，实验条件转膜之后5%脱脂奶粉室温封闭2h，TBST 5min洗膜一次后；1:150 稀释一抗4度封闭过夜，TBST 洗膜5min，3次；1:3000孵育二抗，TBST 洗膜5min，3次后，ECL曝光拍照。补充：我的膜是NC膜，另外第一次买的一抗说明书上没有写含叠氮化钠；第二次买的时候一抗中含叠氮化钠 第一次的结果如下，有两条带，上面的是目的蛋白，下面比较亮的是内参肌动蛋白 但第二次用同样的抗体，只是不同批次的，买的新抗体，内参基因的条带就非常的淡 请多指点，我现在做了几次试验了，从蛋白也重新提取的  第二次试验结果.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有219人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot 出不来结果！！！
已经有17人回复
- Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊！
已经有11人回复
- 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
已经有22人回复
- western blot 背景深浅问题，请大家指教下啊
已经有6人回复
- 求救！OE说我的格式不对——恳请熟悉OE的虫友帮忙指点下！
已经有13人回复
- 在电极上修饰碳纳米管分散不均匀怎么回事啊？哪位虫友帮忙指点一下吧
已经有14人回复
- western-blot实验结果，大家帮忙分析下
已经有7人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出来，不知道原因，大侠给分析一下啊！？
已经有13人回复
- 熟悉Journal of analytical chemistry 的虫友帮忙指点一下
已经有5人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
湖南师范大学医工交叉科研团队招收博士研究生
+1/173
-
香港理工大学-应用生物与化学科技学系 招收2025年博士研究生
+2/92
-
广州，真诚男征女
+1/78
-
87 年东北小哥定居苏州（沪杭亦可），诚寻携手余生的你
+1/73
-
广州
+1/70
-
新年快乐！祝各位诸事顺遂！
+1/69
-
加拿大卡尔加里大学 量子通信和信息方向 硕士/博士招生
+1/50
-
暨南大学理工学院 光子技术研究院段宣明团队申请制读博招生
+1/29
-
【招生啦招生啦】武汉理工大学朱曼副研究员招收2026年9月入学博士/硕士研究生
+1/28
-
深圳大学李天任博士课题组研究生招生信息
+1/26
-
大叔征婚
+1/22
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/17
-
酰胺水解求助
+1/5
-
上海理工大学“新能源材料”专业-赵斌教授招收申请考核制博士生【能源催化方向】
+1/5
-
博士生招生, 南京大学材料物理
+1/3
-
南京林业大学”申请-考核”制学术学位博士研究生招生
+1/3
-
湖南大学机械与运载工程学院赵岩副教授课题组招生2026级普通博士生1名
+1/3
-
合肥工业大学 多智能体方向 2026 级博士招生
+1/1
-
【博士招生】AI+材料/能源及海上能源岛方向有若干申请考核制名额
+1/1
-
所以当初说在欧美生活𣎴用讲人情世故的人怎么生活的
+1/1
★ ★ ★
1985228(金币+1): 谢谢参与
1985228: 金币+2 2013-01-17 13:08:19
1985228(金币+1): 谢谢参与
1985228: 金币+2 2013-01-17 13:08:19
|
只看到一张图。 就你描述的问题，你主要的问题是为什么两次做同样的抗体信号有很大强弱差别是吧。 其实这也是可以理解的。首先，实验室做western与公司完全用仪器监控温度、时间等条件控制是不同的，所以即使是同样的抗体每次做也是会有一些差别的。虽然不知道你是如何控制这些条件，但大多数实验室条件下不能比较两次western信号强弱。而且你说的抗体是不同时候买的，难免批次之间也有一定差别。再加上ECL你用的是公司买的吧，即使保存在4°C，效果也不能保证和新买的完全一样。 一般来说是这样，抗体是有一个线性工作范围的，取合适的稀释度后要load不同蛋白量，western暴光后看是否在抗体的线性工作范围。如果蛋白量超出这个范围，信号的衰减或增加与蛋白量变化不成比例，不能用于定量。实际操作上，实验室为了省钱，有些抗体也不是从公司买的，一般是反复使用一抗的。所以确定线性范围很重要。对新的dilution做一下，一般开始使用较少的蛋白，可以延长一抗使用次数。然后再对用过多次的dilution再次确定线性范围，从而确保做的western blot能够做定量分析。 |
4楼2013-01-17 12:31:20
★
1985228(金币+1): 谢谢参与
1985228(金币+1): 谢谢参与
3楼2013-01-17 12:25:16
6楼2013-01-17 12:57:37
9楼2013-01-17 13:09:25
10楼2013-01-17 13:11:37
11楼2013-01-17 13:36:30
14楼2013-01-17 15:55:50
简单回复
cgf88262楼
2013-01-17 12:24
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与
2013-01-17 12:55
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与
champ7楼
2013-01-17 12:58
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与
hxp28008楼
2013-01-17 13:04
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与
vgyhn12楼
2013-01-17 13:48
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与
顶
seaskyzdw13楼
2013-01-17 13:57
回复
1985228(金币+1): 谢谢参与