应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有经验的虫友帮我分析下两次western blot 的结果吧，望指点
51/1返回列表
查看: 2437  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1985228

铁虫 (小有名气)

[交流] 有经验的虫友帮我分析下两次western blot 的结果吧，望指点

最近做western blot，抗体买的是博士德公司的一抗和二抗，实验条件转膜之后5%脱脂奶粉室温封闭2h，TBST 5min洗膜一次后；1:150 稀释一抗4度封闭过夜，TBST 洗膜5min，3次；1:3000孵育二抗，TBST 洗膜5min，3次后，ECL曝光拍照。补充：我的膜是NC膜，另外第一次买的一抗说明书上没有写含叠氮化钠；第二次买的时候一抗中含叠氮化钠
第一次的结果如下，有两条带，上面的是目的蛋白，下面比较亮的是内参肌动蛋白
但第二次用同样的抗体，只是不同批次的，买的新抗体，内参基因的条带就非常的淡
请多指点，我现在做了几次试验了，从蛋白也重新提取的

第二次试验结果.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-01-17 11:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
1985228(金币+1): 谢谢参与
http://www.med66.com/html/ziliao ... e965d5ab47764d4.htm
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4260205
http://www.dxy.cn/bbs/topic/15622038?onlyHost=1
http://www.douban.com/note/136412904/
http://www.dxy.cn/bbs/thread/756765
http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-7/2005721122900.htm
http://wenku.baidu.com/view/fda2701dfad6195f312ba650.html
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5026740
http://www.dxy.cn/bbs/topic/9546488
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-17 12:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
1985228(金币+1): 谢谢参与
1985228: 金币+2 2013-01-17 13:08:19
只看到一张图。
就你描述的问题，你主要的问题是为什么两次做同样的抗体信号有很大强弱差别是吧。
其实这也是可以理解的。首先，实验室做western与公司完全用仪器监控温度、时间等条件控制是不同的，所以即使是同样的抗体每次做也是会有一些差别的。虽然不知道你是如何控制这些条件，但大多数实验室条件下不能比较两次western信号强弱。而且你说的抗体是不同时候买的，难免批次之间也有一定差别。再加上ECL你用的是公司买的吧，即使保存在4°C，效果也不能保证和新买的完全一样。
一般来说是这样，抗体是有一个线性工作范围的，取合适的稀释度后要load不同蛋白量，western暴光后看是否在抗体的线性工作范围。如果蛋白量超出这个范围，信号的衰减或增加与蛋白量变化不成比例，不能用于定量。实际操作上，实验室为了省钱，有些抗体也不是从公司买的，一般是反复使用一抗的。所以确定线性范围很重要。对新的dilution做一下，一般开始使用较少的蛋白，可以延长一抗使用次数。然后再对用过多次的dilution再次确定线性范围，从而确保做的western blot能够做定量分析。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-01-17 12:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1985228

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-17 12:31:20
只看到一张图。
就你描述的问题，你主要的问题是为什么两次做同样的抗体信号有很大强弱差别是吧。
其实这也是可以理解的。首先，实验室做western与公司完全用仪器监控温度、时间等条件控制是不同的，所以即使是同 ...

谢谢你的宝贵建议了，我QQ514684159，能加QQ吗？我把两次的结果和实验细节发您看看
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-17 13:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1985228 at 2013-01-17 13:09:25
谢谢你的宝贵建议了，我QQ514684159，能加QQ吗？我把两次的结果和实验细节发您看看...

我不用QQ，发我邮箱cicelyzhang@hotmail.com
赞一下 回复此楼
11楼2013-01-17 13:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:52 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 13:35 by C3vABopYbZJS
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +4 tianxiaoxian 2026-09-28 7/350 2026-09-30 08:34 by 88817753
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭