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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有经验的虫友帮我分析下两次western blot 的结果吧，望指点
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1985228

铁虫 (小有名气)

[交流] 有经验的虫友帮我分析下两次western blot 的结果吧，望指点

最近做western blot，抗体买的是博士德公司的一抗和二抗，实验条件转膜之后5%脱脂奶粉室温封闭2h，TBST 5min洗膜一次后；1:150 稀释一抗4度封闭过夜，TBST 洗膜5min，3次；1:3000孵育二抗，TBST 洗膜5min，3次后，ECL曝光拍照。补充：我的膜是NC膜，另外第一次买的一抗说明书上没有写含叠氮化钠；第二次买的时候一抗中含叠氮化钠
第一次的结果如下，有两条带，上面的是目的蛋白，下面比较亮的是内参肌动蛋白
但第二次用同样的抗体，只是不同批次的，买的新抗体，内参基因的条带就非常的淡
请多指点，我现在做了几次试验了，从蛋白也重新提取的

第二次试验结果.jpg
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1楼 2013-01-17 11:57:14
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1985228

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-17 12:31:20
只看到一张图。
就你描述的问题，你主要的问题是为什么两次做同样的抗体信号有很大强弱差别是吧。
其实这也是可以理解的。首先，实验室做western与公司完全用仪器监控温度、时间等条件控制是不同的，所以即使是同 ...

谢谢你的宝贵建议了，我QQ514684159，能加QQ吗？我把两次的结果和实验细节发您看看
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-17 13:09:25
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