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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] ?恼婧吮磉_到原核表達蛋白載體構建的問題?

我有幾個膜蛋白都是昆蟲細胞表達的,感覺效果一般,想換原核試試,不知道換的話有什么要注意的?密碼子應該一樣吧,載體 怎麼換呢? 用什麽載體合適,要注意哪些條件呢
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
膜蛋白的表达本身就不是很容易,很容易形成包涵体,复性时往往有一定难度。如果你希望直接表达成活性形式,表达量可能不是很高。不知道你的蛋白是否有修饰,原核体系主要是缺乏一些蛋白修饰的功能。此外,你需要检查表达基因的使用偏好,如果有宿主稀有密码子的话,表达量会很难上去的。载体也有很多,如果想在大肠杆菌里表达,一般常用的是lac/tac启动子诱导表达,有带不同标签的,可以便于纯化和增加膜蛋白的可溶性。
3楼2013-01-11 09:21:29
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nlbtr

铜虫 (小有名气)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
密码子一定要优化,载体的话就用原核表达的载体,PET系列吧。原核的比昆虫的简单多了,技术也成熟。只是你膜蛋白疏水性肯定比较大,估计原核做的话会比较危险,建议去除信号肽。
2楼2013-01-11 09:15:37
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