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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ?恼婧吮磉_到原核表達蛋白載體構建的問題？
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] ?恼婧吮磉_到原核表達蛋白載體構建的問題？

我有幾個膜蛋白都是昆蟲細胞表達的，感覺效果一般，想換原核試試，不知道換的話有什么要注意的？密碼子應該一樣吧，載體 怎麼換呢？ 用什麽載體合適，要注意哪些條件呢
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1楼 2013-01-11 08:56:10
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nlbtr

铜虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
密码子一定要优化，载体的话就用原核表达的载体，PET系列吧。原核的比昆虫的简单多了，技术也成熟。只是你膜蛋白疏水性肯定比较大，估计原核做的话会比较危险，建议去除信号肽。
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2楼2013-01-11 09:15:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
膜蛋白的表达本身就不是很容易，很容易形成包涵体，复性时往往有一定难度。如果你希望直接表达成活性形式，表达量可能不是很高。不知道你的蛋白是否有修饰，原核体系主要是缺乏一些蛋白修饰的功能。此外，你需要检查表达基因的使用偏好，如果有宿主稀有密码子的话，表达量会很难上去的。载体也有很多，如果想在大肠杆菌里表达，一般常用的是lac/tac启动子诱导表达，有带不同标签的，可以便于纯化和增加膜蛋白的可溶性。
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3楼2013-01-11 09:21:29
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