| 查看: 2448 | 回复: 4 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
如何利用基因组DNA进行real time PCR ？？？？
|
|||
|
求助利用基因组DNA进行real-time PCR的相关问题。急急急急急！！！ 我先介绍下试验设计：最近想要进行一个实验，是对基因组DNA进行葡萄糖基化修饰，然后利用内切酶进行酶切，在酶切位点的两端设计引物，并进行real-time PCR。如果内切酶识别的酶切位点被修饰了，则切不断；反之，没被修饰的能够切断。这样在酶切位点两端设计引物，进行real-time PCR，如果有扩增的片段，就证明酶切位点被修饰了，因为修饰的位点不能被切断；反之，没有扩增片段就证明这个位点没有被修饰。real-time PCR的结果就能体现修饰后，基因组DNA上酶切位点的修饰程度。 我现在有几个问题： 1.之前都是用mRNA进行逆转录PCR，然后用cDNA做模板进行real-time PCR，为了看基因的表达，这类real-time PCR可以选用GAPDH或者18S做内参。没做过用基因组DNA做模板进行real-time PCR。如果用基因组DNA做模板进行real-time PCR的话，应该选用什么做内参？ 2.如果用相对定量法进行实验组与对照组之间的比较，可以用2-△△CT法吗？ 3.如果不能用2-△△CT法，用什么方法检测实验组与对照组的差别。 还望各位，不吝赐教。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有64人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组PCR 无结果
已经有4人回复
- 棉花基因组DNA，来做tublin的PCR,可是做了好多次了，连弥散都没有
已经有7人回复
- 请问，用基因组DNA和cDNA做模板进行PCR有什么区别呀？
已经有6人回复
- 基因组PCR的问题
已经有3人回复
- 提基因组的时候做第一次PCR效果很好，但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...
已经有14人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 环状基因组的PCR
已经有4人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- HindIII酶切基因组DNA
已经有4人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- real time PCR能测定基因组内某一基因的拷贝数吗？
已经有4人回复
- 如何确定cDNA中是否还含有基因组DNA？
已经有7人回复
- 【求助/交流】我刚提的植物基因组DNA的电泳图，请高手看看
已经有12人回复
- 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
已经有18人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】提取的植物基因组DNA电泳图，疑问？？？
已经有17人回复
4楼2013-01-11 10:18:48
ccharlien
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 2630.1
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 180.3小时
- 虫号: 1168776
- 注册: 2010-12-13
- 性别: GG
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-10 20:28:21
ada800515: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-14 09:57:25
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-10 20:28:21
ada800515: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-14 09:57:25
|
以前做过SNP位点的RFLP，和你的设计差不多，不过只要PCR--酶切--电泳,就可以看到结果 你的设计是基因组--处理--酶切--Realtime PCR，是这个意思么？ 如果酶切之后可以电泳看到条带差别也就别做定量PCR了，多说明不了什么问题 我觉得如果要做的话，开始试验时设计一个管家基因比如GAPDH和一个你这个基因的其他片断做对照就行了 |
2楼2013-01-10 17:52:50
ccharlien
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 2630.1
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 180.3小时
- 虫号: 1168776
- 注册: 2010-12-13
- 性别: GG
3楼2013-01-10 17:57:32
ccharlien
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 2630.1
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 180.3小时
- 虫号: 1168776
- 注册: 2010-12-13
- 性别: GG
5楼2013-01-11 17:49:41
