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如何利用基因组DNA进行real time PCR ？？？？
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求助利用基因组DNA进行real-time PCR的相关问题。急急急急急！！！ 我先介绍下试验设计：最近想要进行一个实验，是对基因组DNA进行葡萄糖基化修饰，然后利用内切酶进行酶切，在酶切位点的两端设计引物，并进行real-time PCR。如果内切酶识别的酶切位点被修饰了，则切不断；反之，没被修饰的能够切断。这样在酶切位点两端设计引物，进行real-time PCR，如果有扩增的片段，就证明酶切位点被修饰了，因为修饰的位点不能被切断；反之，没有扩增片段就证明这个位点没有被修饰。real-time PCR的结果就能体现修饰后，基因组DNA上酶切位点的修饰程度。 我现在有几个问题： 1.之前都是用mRNA进行逆转录PCR，然后用cDNA做模板进行real-time PCR，为了看基因的表达，这类real-time PCR可以选用GAPDH或者18S做内参。没做过用基因组DNA做模板进行real-time PCR。如果用基因组DNA做模板进行real-time PCR的话，应该选用什么做内参？ 2.如果用相对定量法进行实验组与对照组之间的比较，可以用2-△△CT法吗？ 3.如果不能用2-△△CT法，用什么方法检测实验组与对照组的差别。 还望各位，不吝赐教。 |
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ccharlien
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3楼2013-01-10 17:57:32
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【答案】应助回帖
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以前做过SNP位点的RFLP，和你的设计差不多，不过只要PCR--酶切--电泳,就可以看到结果 你的设计是基因组--处理--酶切--Realtime PCR，是这个意思么？ 如果酶切之后可以电泳看到条带差别也就别做定量PCR了，多说明不了什么问题 我觉得如果要做的话，开始试验时设计一个管家基因比如GAPDH和一个你这个基因的其他片断做对照就行了 |
2楼2013-01-10 17:52:50
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ccharlien
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