应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于原核表达
91/1返回列表
查看: 1046  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

18853850850

金虫 (正式写手)

[求助] 关于原核表达

最近在用BL21表达一个蛋白，这个蛋白有100多KD,表达量比较低，大量诱导之后用含8M 尿素的Buffer溶解，蛋白量很少，我要纯化这个蛋白做检测用，需要一定的蛋白量，纯化过一次最后接下来的东西什么都没有，怎么回事啊，请教一下哪位高手能指点指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
学自己想知道的
1楼 2013-01-04 10:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18853850850: 金币+2 2013-02-01 09:58:34
18853850850: 金币+3 2013-02-01 09:59:34
你是指诱导条件下本身蛋白就少，还是说复性率低？用尿素复性本身有些时候就比较麻烦，复性出来的蛋白未必与体内活性形式一样。如果需要活性蛋白，优化条件有时候能达到不错的可溶蛋白量，接下来的工作反而轻松。
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-04 11:08:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的分子量大，应该有包涵体吧。如果直接电泳的话含量如何？8M尿素复性会非常困难，建议实用其他的复性条件
赞一下 回复此楼
shine
3楼2013-01-04 15:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18853850850

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 11:08:40
你是指诱导条件下本身蛋白就少，还是说复性率低？用尿素复性本身有些时候就比较麻烦，复性出来的蛋白未必与体内活性形式一样。如果需要活性蛋白，优化条件有时候能达到不错的可溶蛋白量，接下来的工作反而轻松。

蛋白本身表达的不多，用尿素溶解看不到被浓缩了；蛋白有没有活性不重要，只想拿到纯的蛋白就行。
赞一下 回复此楼
学自己想知道的
4楼2013-01-05 12:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18853850850

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 15:39:14
你的分子量大，应该有包涵体吧。如果直接电泳的话含量如何？8M尿素复性会非常困难，建议实用其他的复性条件

直接电泳看不到明显的条带
赞一下 回复此楼
学自己想知道的
5楼2013-01-05 12:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
18853850850: 金币+3 2013-02-01 09:59:03
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18853850850 at 2013-01-05 12:10:58
蛋白本身表达的不多，用尿素溶解看不到被浓缩了；蛋白有没有活性不重要，只想拿到纯的蛋白就行。...

如果表达量本身就低，先优化下诱导条件吧，温度、IPTG浓度、时间什么的。不同蛋白最优条件不同的。
如果不在乎是否有活性，直接大量表达很有可能形成包涵体，纯化起来挺容易的，不过复性起来有时候头痛。
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-05 12:56:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinmiao94

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-01-25 07:13:02
18853850850: 金币+2 2013-02-01 09:59:16
本帖内容被屏蔽
7楼2013-01-24 15:16:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18853850850

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xinmiao94 at 2013-01-24 15:16:37
有的蛋白本身就低，纯化前做没做SDS-PAGE没？纯化前用没用超声波破碎菌体？

做过，蛋白没有得到浓缩，与原始菌液中蛋白量相当
赞一下 回复此楼
学自己想知道的
8楼2013-01-25 10:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinmiao94

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2013-07-03 11:13:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18853850850 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 281求调剂 +4 Koxui 2026-03-24 5/250 2026-03-25 11:38 by userper
[考研] 292求调剂 +4 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 4/200 2026-03-25 10:37 by barlinike
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭