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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR实验操作过程中遇到的问题 已有1人参与

各位实验高手大家好!
    PCR菜鸟请教大家一个小问题,我采用RT-PCR做半定量测定时一般平行做三分样品,最后扩增的三条曲线不怎么重合,有时差别还很大。我一般加完样后,用枪头混合样品15下左右,最后枪头上可能会残留点点样品。
    请问大家有没有遇到三条线不重合这个问题,有什么好的建议和意见吗?还有大家加完样后需不需要用枪头混合均匀?
    期待大家的答复,先谢谢各位!
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小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
821078607: 金币+2 2013-01-03 17:19:06
只要做内参一切都OK啦,曲线的影响因素很多
飞的更高
9楼2013-01-03 00:07:44
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
821078607: 金币+4 2013-01-03 17:19:55
你这个三分样品是怎么个意思?比如取自三个不同的个体,的确很有可能不重合啊,个体差异性对实验结果影响很大的。
2楼2013-01-02 18:09:27
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821078607

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-01-02 18:09:27
你这个三分样品是怎么个意思?比如取自三个不同的个体,的确很有可能不重合啊,个体差异性对实验结果影响很大的。

取自同一个样品也不重合
请问你一般是怎么操作的
3楼2013-01-02 19:39:50
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红果子1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
20ul体系,我是试剂混合均匀,先加18ul的混合液,再加2ul模板,轻轻离心一下就可以了。
4楼2013-01-02 19:45:17
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