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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR实验操作过程中遇到的问题
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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR实验操作过程中遇到的问题 已有1人参与

各位实验高手大家好！
    PCR菜鸟请教大家一个小问题，我采用RT-PCR做半定量测定时一般平行做三分样品，最后扩增的三条曲线不怎么重合，有时差别还很大。我一般加完样后，用枪头混合样品15下左右，最后枪头上可能会残留点点样品。
    请问大家有没有遇到三条线不重合这个问题，有什么好的建议和意见吗？还有大家加完样后需不需要用枪头混合均匀？
    期待大家的答复，先谢谢各位！
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1楼 2013-01-02 15:10:53
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821078607

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 红果子1987 at 2013-01-02 19:45:17
20ul体系，我是试剂混合均匀，先加18ul的混合液，再加2ul模板，轻轻离心一下就可以了。

我一般也是20uL体系，现加18混合液，再加2ul的模板，我会先用枪混合之后，再进行离心，可是出来的曲线不重合还有的差很多，你离心前有没有用枪吹打混匀，还是直接加了离心就可以？
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6楼2013-01-02 22:02:49
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
821078607: 金币+4 2013-01-03 17:19:55
你这个三分样品是怎么个意思？比如取自三个不同的个体，的确很有可能不重合啊，个体差异性对实验结果影响很大的。
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2楼2013-01-02 18:09:27
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821078607

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-01-02 18:09:27
你这个三分样品是怎么个意思？比如取自三个不同的个体，的确很有可能不重合啊，个体差异性对实验结果影响很大的。

取自同一个样品也不重合
请问你一般是怎么操作的
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3楼2013-01-02 19:39:50
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红果子1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
20ul体系，我是试剂混合均匀，先加18ul的混合液，再加2ul模板，轻轻离心一下就可以了。
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4楼2013-01-02 19:45:17
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