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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR，跑胶，求分析胶片
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR，跑胶，求分析胶片

这是这几天跑得胶，为什么一直有拖尾似的东西。而且以前可以跑出来的引物也有那样的拖尾似的东西，并且挺多的。求解惑啊！求指点啊！

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1楼 2012-12-30 21:51:34
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sj_wu at 2012-12-30 21:57:56
还算正常，只是没有主带，拖尾是其他能被EB染色的杂质，如蛋白、酶以及其他分子

，但是为什么每次都有拖尾呢？
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3楼2012-12-30 22:17:50
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:18:46
跑的是什么？PCR产物吗？感觉是样品不干净。marker不拖说明是样品问题。还有，你的胶的点样孔怎么那么亮啊。

我是以cDNA为模板跑的PCR，点样孔亮，我不清楚了，一直都是这样的
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5楼2012-12-31 08:24:55
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fanwq258

木虫 (正式写手)
没人帮我吗？快来人啊
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6楼2012-12-31 08:25:25
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 09:19:59
你有没有试试用不同浓度的模板P？...

模板还可以不同吗？都是按试剂盒要求加的模板啊
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12楼2012-12-31 13:42:20
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fanwq258

木虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 晓林寒风 at 2012-12-31 09:30:25
楼主，你做胶的梳子不干净吧，有DNA或者蛋白质残留吧。你cDNA做的文库么？

梳子？每次做胶之前都是酒精擦拭干净的，然后TAE冲洗。模板是师兄提的RNA反转录出来的cDNA。
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13楼2012-12-31 13:47:00
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-12-31 12:54:52
其实我感觉是缓冲液的问题吧

你说的是电极缓冲液的问题吗？我是稀释的以前师兄配的母液，昨天还测了一下PH8.2，应该可以吧。
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14楼2012-12-31 13:54:14
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fanwq258

木虫 (正式写手)
marker看着还可以呀，缓冲液感觉应该没问题吧。
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15楼2012-12-31 13:58:03
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fanwq258

木虫 (正式写手)
求建议啊
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17楼2012-12-31 14:18:26
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 16:50:14
不同基因mRNA的丰度不同，反转录出来的cDNA量也是不一样的。PCR的时候要考虑这个问题吧。...

我的cDNA浓度800多ng/ml，满足试剂盒的要求啊
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23楼2012-12-31 22:33:39
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-01 02:57:29
你PCR用的模板是双链cDNA吗？...

不是，是单链cDNA，有什么不一样吗？
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26楼2013-01-01 12:30:01
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by xj0311 at 2013-01-01 09:55:33
换一下引物，重新设计，另外胶的浓度调整一下

我以前可以扩出来的引物，现在也扩不出来了，就算出来了，也只有一点，拖尾现象很重
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27楼2013-01-01 12:31:32
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
32楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-02 08:55:13
Marker选择的有点问题呀！样品条带不清晰，可能不纯或浓度过高

你的意思是模版不纯或浓度过高？
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34楼2013-01-02 12:14:31
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fanwq258

木虫 (正式写手)
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38楼: Originally posted by lyaikele at 2013-05-19 19:41:37
楼主，我最近也遇到你这种情况了，请问你的是怎么解决的啊？求交流！！...

我的就是没跑出来，都是引物二聚体，从新换引物了，可以跑出来了
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39楼2013-05-20 08:15:38
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