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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-30 18:55:57
载体构建好了,鉴定没问题后,就转化表达菌啊,pET系列的要转化带DE3的表达菌,比如BL21(DE3)等,DH5a不能用来表达pET28a载体。
如果已经转化了表达菌。那么可以挑克隆,进行小量诱导了。
具体方法就是:
1、挑克隆到试管中,比如20ml试管中装入5mlLB培养基,加相应的抗生素。过夜培养得到种子菌。
2、同样20ml试管中装5ml LB培养基,接入摇好的种子菌,接种量1%-5%。自己看着接就行了。
3、37℃,200-250rpm培养
4、OD600到0.6-0.8时,加入母液浓度为1M的IPTG,致终浓度0.1-1.0mM。第一次小诱可以加到终浓度1mM。
5、37度过夜诱导。16小时左右。
6、第二天取1ml菌液,离心,菌体沉淀用100ul 去离子水,或PBS或TRIS buffer重选,加loading buffer跑电泳。
7、如果确定有表达,就可以破菌鉴定可溶性了。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2012-12-30 13:24:14
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