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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急！重组蛋白怎么突然不表达了？
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 急！重组蛋白怎么突然不表达了？

用构建的表达质粒重新转了个板，什么条件都是一样的，但是没有目的蛋白表达了，请问各位有遇到过这种情况吗？可能是什么原因引起的？
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1楼 2012-12-30 11:04:34
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力亮

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把质粒提出来  重新转一下感受态   看看行吗
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突然间的自我
2楼2012-12-30 12:32:44
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 力亮 at 2012-12-30 12:32:44
把质粒提出来  重新转一下感受态   看看行吗

就是质粒重新转的。。。突然发现跑电泳的时候不是完全没有表达，而是表达的条带位置不对了，而且还是两天带，做了几次都是这样，好奇怪
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3楼2012-12-30 13:56:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shenxing325: 金币+6 2013-01-09 09:14:06
如果你有以前表达正确的菌种保藏在-80，直接拿来活化检测。没有的话，把质粒送测序，如果序列没问题的话再重新转化受体细胞。
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4楼2012-12-30 16:14:39
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Jathan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
shenxing325: 金币+5 2013-01-09 09:14:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-12-30 13:56:21
就是质粒重新转的。。。突然发现跑电泳的时候不是完全没有表达，而是表达的条带位置不对了，而且还是两天带，做了几次都是这样，好奇怪...

可能是质粒的超螺旋或者开环形式，这样大小肯定就不是原来的了。最好还是提下质粒去测序，这个稳妥些
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5楼2013-01-03 13:25:57
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