| 查看: 5370 | 回复: 15 | |||
[求助]
求助大肠杆菌发酵问题 已有1人参与
|
|||
|
我们在做大肠杆菌的工程菌株发酵。以下是基本信息： 菌株为B21(DE3)； 携带质粒为PTRC99Z质粒（有外源基因）； 发酵罐：5L 培养基：多种培养基都试过。包括无机盐、复合培养基（配方见《高细胞密度发酵技术》 李寅 等 著，化学工业出版社）。碳源用过葡萄糖以及甘油，现象相似。 发酵液pH:6.8，以氨水调控； 发酵罐温度：25~30都用过，用以调节发酵初期细菌比生长速率； 发酵罐罐压：0.06、0.04MPa以及0.02MPa都试过； 转速：从400~900rpm都试过； 通气量：200L/h到400L/h都试过； 通过补料速率，控制溶氧为30%； 用的有机氮源: 1.酵母抽提物 2.蛋白胨 3.蛋白胨+酵母抽提物; 无机氮源： 1、磷酸二氢铵； 2、硫酸铵。 至于碳源浓度,都是培养基的初始碳源消耗完以后才开始流加，甘油做碳源的时候我没有测过培养基的碳源浓度，但是葡萄糖做碳源时候，斐林试剂滴定法测碳源浓度发现葡萄糖浓度较低，我的溶氧是由碳源流加速度控制的，溶氧浓度在30~60％。 乙酸的确抑制大肠杆菌生长，但是乙酸合成原因是什么?我一直怀疑是种子或溶氧的问题，造成乙酸的合成，进而抑制大肠杆菌生长，因为1）我们的甘油种子是保存在-20℃;2）很多文献包括论坛上都说要通入高浓度氧，而我从来没有用过。 现象： 不管培养基、发酵工艺是什么样，每次菌长到0D600=30，就开始增长速度极慢（期间没有加任何诱导剂哦）；尽管发酵液离心后沉淀量一直增加，但是OD600的吸光值变化不大，甚至有所降低； 发酵液粘度增加，泡沫较大； 碳源一直在消耗，但是生物量不增加，产酸量大（因为消耗氨水量大）； 离心后，菌泥呈两种颜色，下层为乳白色（颜色稍稍淡黄，健康大肠杆菌颜色），上层颜色较深。 遂请问各位达人，上述现象原因为何？如何解决这些问题？不通入高浓度氧时候，OD最高能到多少（请生产PHB和PHA的朋友忽略这个问题）？ [ Last edited by hanjun80 on 2012-12-10 at 05:43 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 高密度发酵 |
» 猜你喜欢
求调剂院校信息
已经有4人回复
-
085600材料与化工306
已经有4人回复
-
286求调剂
已经有10人回复
-
328求调剂，英语六级551，有科研经历
已经有9人回复
-
一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂
已经有4人回复
-
286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！
已经有8人回复
-
资源与环境 调剂申请(333分)
已经有5人回复
-
280求调剂
已经有12人回复
-
269专硕求调剂
已经有5人回复
-
材料学硕301分求调剂
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 发酵大肠杆菌染噬菌体！！
已经有5人回复
- 大肠杆菌发酵优化
已经有22人回复
- 大肠杆菌培养过程中OD600相关问题？
已经有6人回复
- 关于IPTG在人用药物蛋白大肠杆菌发酵表达中的应用问题
已经有2人回复
- 重组大肠杆菌培养的问题
已经有17人回复
- 细菌发酵 求助
已经有11人回复
- 大肠杆菌培养问题
已经有10人回复
- 大肠杆菌能发酵蔗糖吗？
已经有5人回复
- 大肠杆菌工程菌发酵染菌问题解决方案
已经有7人回复
- 大肠杆菌细胞破碎实验的一些问题？
已经有5人回复
- 各位做大肠杆菌发酵的朋友看过来，这到底是什么问题？
已经有18人回复
- 求助：10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题
已经有22人回复
- 大肠杆菌形态问题
已经有3人回复
- 大肠杆菌的活化时间问题
已经有4人回复
- 观察大肠杆菌形貌问题
已经有8人回复
- 请教一下大肠杆菌合成氨基酸的问题
已经有4人回复
- 大肠杆菌发酵问题
已经有28人回复
- 【求助】多管发酵法测定粪大肠杆菌疑问
已经有13人回复
- 【求助】大肠杆菌的测定
已经有10人回复
- 【求助/交流】菌体自溶是什么原因？
已经有28人回复
- 【求助】检测大肠杆菌的水样如何保存
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌BL21的问题
已经有4人回复
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
2楼2012-12-10 08:07:31
m_rna
银虫 (小有名气)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 598.5
- 散金: 20
- 帖子: 131
- 在线: 30.3小时
- 虫号: 1556298
- 注册: 2011-12-29
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-12-10 09:58:27
4楼2012-12-10 12:01:11
5楼2012-12-10 13:00:50
6楼2012-12-10 13:16:35
7楼2012-12-10 20:01:31
zcqh27
木虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3959.5
- 散金: 141
- 帖子: 638
- 在线: 164.4小时
- 虫号: 1117804
- 注册: 2010-10-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2012-12-12 10:03:57
9楼2013-05-24 11:13:42
10楼2014-04-07 21:26:23
