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alan008alan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dxh708 at 2012-12-29 10:57:22
通用引物是不是无法扩增出所有细菌,其实16s全长的引物用27f和1492r就好了,这对引物可扩增出所有的细菌,当然例外的还未发现,这对引物通常用于菌种鉴定,其中也有两个碱基为兼并碱基。该引物序列如下:
27f:AGA  ...

我用27L和1492R这对引物扩增两种不同的菌各10株,均纯化过4-5次,电泳出来都有2条带,1500bp左右一条较亮的,1300bp左右一条较浅的,做了两次(细菌DNA提取和PCR都做两次)均是相同情况。
为什么会有两条带啊?可能是什么情况引起的?我要做菌种鉴定的,该怎么办?
5楼2013-01-19 20:51:05
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查看全部 7 个回答

sportsgenie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先要做的是尽可能收集多的细菌16S序列进行clustal比对,这样能看到保守区的位置。但完全保守的区域是没有,还是会存在个别碱基的差异,所以还是建议用兼并引物。
2楼2012-12-13 10:42:19
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dxh708

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

通用引物是不是无法扩增出所有细菌,其实16s全长的引物用27f和1492r就好了,这对引物可扩增出所有的细菌,当然例外的还未发现,这对引物通常用于菌种鉴定,其中也有两个碱基为兼并碱基。该引物序列如下:
27f:AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG
1492r:TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T
dongxioahui
4楼2012-12-29 10:57:22
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小柒_s

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、16S扩增引物的效果更好。例如8F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') and reverse primer 533R (5'-TTACCGCGGCTGCTGGCAC-3')这个和其他文章的结果差不多,no rank较少。
2、可真核生物测序为什么在门的水平上出现很多NO Rank和SAR呢,大概占到75%,我的样本是水样,是不是这与引物相关呢,为何查文献其他人的比例没有这么高?
行万里路,读万卷书
6楼2013-10-26 17:46:21
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