24小时热门版块排行榜    

查看: 1569  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)


[交流] 连接表达载体后的检测问题

最近一直在做酶切,连接,以及检测
但是发现一些问题,想咨询大家,最近结果如下:
1. 酶切后连接,这部分做的比较稳定,长斑情况虽不是特别多,只有那么几个
2.将长好的斑摇菌后,提质粒,质粒PCR,都有合适的条带
3.不加模板,PCR的结果很郁闷,一共4个基因,1号基因扩出来了,2,3,4,没有
4.将空载体作为模板,PCR的结果:1,2,3,4都有条带,但2的条带比目的条带偏小,3比目的条带偏大,1和4的条带看着和目的条带大小一样。

现在的问题是:不明白为什么空载体能扩出来东西?如果说我的引物污染了,那不加模板也应该是能扩出来东西的;用的是生工买的PCR mix  
现在这些结果真是让人郁闷,希望大家帮忙分析一下这个情况该如何
是不是得重新开始?
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你质粒大小对吗?PCR鉴定可以用,一般用于大量粗筛。不过你只有几个克隆,又提了质粒,做酶切鉴定更靠谱。
5楼2012-12-03 04:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

wangqi20092

新虫 (小有名气)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
把图片发过来看看,空载体都能出条带,如果引物没污染,那就是你的空载体不是空载体,所以想办法确定是空载体。
2楼2012-12-02 12:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
发图给大家看看,可以帮忙解决问题哈

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-12-02 12:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
PCR验证本就不可靠,为嘛不做酶切,酶切不是一目了然麽……比PCR可靠多了.
空载也有可能扩出条带的,我就被坑过一次,所以之后都不信任PCR验证了.
4楼2012-12-02 13:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见