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fddyn

金虫 (小有名气)

[求助] pcr有杂带,疑似模板

土壤微生物PCR后,总出现一条类似模板的条带,求解释
模板浓度和上样量见图片

2012-11-27.JPG
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-28 13:47:51
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助, 已经减少上样量了,还是有,那再试试稀释吧 2012-11-28 18:39:55
既然疑似模板何不降低浓度再试试,不知道你是多少的Marker,模板是不是基因组,不过从片段的位置分析,应该是模板过浓了.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-11-28 08:52:57
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fddyn

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-11-28 08:52:57
既然疑似模板何不降低浓度再试试,不知道你是多少的Marker,模板是不是基因组,不过从片段的位置分析,应该是模板过浓了.

我用的Marker是D2000
模板指的是基因组dna,模板上样量和浓度图中都标出来了
pcr反应体系是25ul的:引物 1ul
                                rTaq  12.5ul (是TAKARA的混酶)
                    H2O   (就是25ul减模板、引物、和酶)
3楼2012-11-28 18:44:06
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-29 19:39:14
不一定是模版啊,换个高分子量的marker试试,或者是只把模版来跑个电泳
4楼2012-11-29 06:01:32
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-11-29 19:39:24
你的模板浓度太高了,当中那个图0.5ul 22.7ng 就没有类似基因组DNA的那条带,因此,可按照0.5ul 20ng 标准对样品进行稀释。
5楼2012-11-29 08:36:02
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