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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr有杂带，疑似模板
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fddyn

金虫 (小有名气)

[求助] pcr有杂带，疑似模板

土壤微生物PCR后，总出现一条类似模板的条带，求解释
模板浓度和上样量见图片

2012-11-27.JPG
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1楼 2012-11-27 21:29:57
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-28 13:47:51
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助, 已经减少上样量了，还是有，那再试试稀释吧 2012-11-28 18:39:55
既然疑似模板何不降低浓度再试试，不知道你是多少的Marker，模板是不是基因组，不过从片段的位置分析，应该是模板过浓了.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-11-28 08:52:57
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fddyn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-11-28 08:52:57
既然疑似模板何不降低浓度再试试，不知道你是多少的Marker，模板是不是基因组，不过从片段的位置分析，应该是模板过浓了.

我用的Marker是D2000
模板指的是基因组dna，模板上样量和浓度图中都标出来了
pcr反应体系是25ul的：引物 1ul
                                rTaq  12.5ul （是TAKARA的混酶）
                    H2O   （就是25ul减模板、引物、和酶）
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3楼2012-11-28 18:44:06
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-29 19:39:14
不一定是模版啊，换个高分子量的marker试试，或者是只把模版来跑个电泳
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4楼2012-11-29 06:01:32
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-11-29 19:39:24
你的模板浓度太高了，当中那个图0.5ul 22.7ng 就没有类似基因组DNA的那条带，因此，可按照0.5ul 20ng 标准对样品进行稀释。
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5楼2012-11-29 08:36:02
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