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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
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three姚

银虫 (小有名气)

[求助] 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？ 已有3人参与

本人生态学专业，分子方面略懂皮毛。用上海生工的土壤DNA提取试剂盒从土样中提DNA，按照说明书操作，前后提了四次，0.8%琼脂糖凝胶电泳，什么都没跑出来。。。。。。借用师兄的Powersoil的试剂盒又提了一次，还是什么都没有。。。。。。土样是老师给的，经过研磨等前期处理，具体的我也不清楚，不知道会有什么影响。但不管怎么样，土壤中肯定有微生物，不应该什么都提不出来啊。。。实在想不出原因， 只好请教各位，请大家帮我分析一下，是什么原因？
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
1楼 2012-11-24 20:01:05
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kkunny

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以换个样品试一下，看看是样品的问题？试剂问题？还是操作问题？
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好好学习，天天向上
2楼2012-11-25 20:16:44
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xiaoyaoyou0

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试mpbio的土壤试剂盒，也许可以，我一直用的是这个
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3楼2012-11-25 20:29:06
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three姚

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kkunny at 2012-11-25 20:16:44
你可以换个样品试一下，看看是样品的问题？试剂问题？还是操作问题？

样品换过的。。。其实之前拿老师以前的样品做过，也是没结果的。。。我打算富集一下再试试
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
4楼2012-11-26 21:59:37
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three姚

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyaoyou0 at 2012-11-25 20:29:06
试试mpbio的土壤试剂盒，也许可以，我一直用的是这个

谢了。。。不过这个得看老师有多少钱。。。。。。
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思念是一棵没有年轮的树，永不老去
5楼2012-11-26 22:01:28
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xiaoyaoyou0

铜虫 (初入文坛)
同感
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6楼2012-11-28 13:34:27
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yinhongguo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

会不会是样品的量太少，我提的是水里的，之前也是什么也跑不出，后来将量增加一倍，然后就有了，另外你想想操作有没有问题
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7楼2012-11-29 09:39:52
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该是量的问题，你问问以前他们是怎么做的
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8楼2012-11-30 17:02:14
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hilihuo

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

DNA浓度多少？A260/280之类的数据如何呢？
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宁愿独自沧桑
9楼2012-11-30 22:09:05
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pangzio

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

第一、土壤样品是什么，有可能里面所含的微生物就很少，所以跑胶的时候，你是不会看见清晰条带的，提取完直接进行PCR，要设置阴性对照，看里面是否有微量的DNA；
第二、生工的盒子没有配除腐植酸的试剂，也许是腐植酸影响了；
第三、你提取的土壤若盐、碱的含量高的话，一般的试剂盒很难提出来，反而手配的试剂好提取点，当然买个质量好点的盒子一下可以解决以上的问题。
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10楼2012-12-22 13:41:06
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